Untersuchungen zum Einfluss von alpha Defensinen aus neutrophilen Granulozyten auf die primäre Hämostase
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Gießen
VVB Laufersweiler
2008
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS 1. EINLEITUNG 1.1. THROMBOZYTEN 2 1.2.
THROMBOZYTENMORPHOLOGIE 3 1.3. HAEMOSTASE 7 1.3.1. ADHAESION 7 1.3.2.
AKTIVIERUNG UND SEKRETION 8 1.3.3. AGGREGATION 10 1.3.4. SEKUNDAERE
HAEMOSTASE 10 1.3.5. GEGENREGULATION DER AKTIVIERUNG 12 1.3.6.
FIBRINOLYSE 13 1.4. THROMBOZYTEN ALS ABWEHRZELLEN 13 1.4.1. PLAETTCHEN
TEILEN STRUKTURELLE UND FUNKTIONELLE MERKMALE MIT BEKANNTEN ABWEHRZELLEN
14 1.4.2. PLAETTCHEN AGIEREN DIREKT UND INDIREKT MIT MIKROORGANISMEN 15
1.4.3. THROMBOZYTAERE ANTIMIKROBIEILE PEPTIDE 16 1.4.4. THROMBOZYTEN UND
LEUKOZYTEN INTERAGIEREN SYNERGISTISCH 17 1.5. DEFENSINE 19 1.5.1. ALPHA
DEFENSINE 20 1.5.2. BETA-DEFENSINE 22 GESCANNT DURCH BIBLIOGRAFISCHE
INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/990154424 DIGITALISIERT DURCH 2.3.5.
ZELLZAEHLUNG 36 1.5.3. O-DEFENSINE 23 1.6. DEFENSIN-AKTIVITAET 23 1.6.1.
ZYTOLYTISCHER EFFEKT 23 1.6.2. MODULATION DER INNATEN UND ADAPTIVEN
IMMUNABWEHR 25 1.6.3. PATHOPHYSIOLOGIE 26 1.7. HINTERGRUND UND
FRAGESTELLUNG DER WISSENSCHAFTLICHEN ARBEIT 28 2. MATERIAL UND METHODEN
29 2.1. GERAETE 29 2.1.1. DURCHFLUSSZYTOMETER 29 2.1.2. ELISA-READER 29
2.1.3. ZENTRIFUGEN 29 2.1.4. WEITERE GERAETE 30 2.2. CHEMIKALIEN 30
2.2.1. ANTIKOERPER 31 2.3. PRAEPARATION VON THROMBOZYTEN UND MONOZYTEN 32
2.3.1. ISOLIERUNG VON THROMBOZYTEN DURCH GEWINNUNG VON PLAETTCHENREICHEM
PLASMA (PRP) 32 2.3.2. ISOLIERUNG VON THROMBOZYTEN MITTELS GELFILTRATION
32 2.3.3. HERSTELLUNG VON PLAETTCHEN-ARMEN PLASMA(PPP) 34 2.3.4.
ISOLIERUNG DER LEUKOZYTEN 34 2.6. DETEKTION VON THROMBOZYTEN
-LEUKOZYTEN-ASSOZIATEN 52 2.4. ZELLAKTIVIERUNG 36 2.4.1. DEFENSIN 36
2.4.2. THROMBIN 37 2.4.3. KOLLAGEN 38 2.4.4. ADP 39 2.4.5.
C-TERMINALESTSP-1-PEPTIDRFYWMWK 39 2.5. DETEKTION VON
PLAETTCHENAKTIVIERUNG 40 2.5.1. DURCHFLUSSZYTOMETRIE 41 2.5.2. NACHWEIS
DER PLAETTCHENAKTIVIERUNG 45 2.5.3. FIBRINOGENBINDUNG 45 2.5.4.
A-GRANULA-SEKRETION 47 2.5.5. SEKRETION DER ELEKTRONENDICHTEN GRANULA
(DENSE-BODIES), CD63- EXPRESSION 48 2.5.6. EXPRESSION DES CD40 LIGANDEN
48 2.5.7. BINDUNG VON EXTERN ZUGESETZTEM TSP-1 48 2.5.8. PROKOAGULANTER
ZUSTAND 49 2.5.9. MESSUNG DER ANNEXIN V-BINDUNG AN THROMBOZYTEN 50
2.5.10. MESSUNG DER FAKTOR VLLL-BINDUNG AN THROMBOZYTEN 50 2.5.11.
MESSUNG DER FAKTOR XA-BINDUNG AN THROMBOZYTEN 51 2.5.12. MESSUNG VON
THROMBOZYTENMIKROPARTIKELN 51 2.12. STATISTISCHE ABSICHERUNG DER
EXPERIMENTELLEN DATEN 66 2.6.1. PROBENVORBEREITUNG FUER UNTERSUCHUNGEN IM
VOLLBLUT 52 2.7. EINFLUSS VERSCHIEDENER MODULATOREN AUF DIE
THROMBOYTENAKTIVIERUNG DURCH DEFENSIN 54 2.7.1. ANTITHROMBIN III 54
2.7.2. HEPARIN 55 2.7.3. THROMBOSPONDIN-1 56 2.7.4. HIRUDIN 57 2.7.5. A
2-MAKROGLOBULIN 57 2.7.6. A 1-ANTITRYPSIN 58 2.7.7. VITRONECTIN 58
2.7.8. LLOPROSTUND PGE-1 59 2.7.9. BACITRACIN 59 2.8. ELISA-VERFAHREN 60
2.8.1. SCD 40 L ELISA 60 2.9. THROMBINBILDUNGSASSAY 61 2.10.
ENDOTHELZELLVERSUCHE 63 2.10.1. KULTIVIERUNG VON HMEC-1 (HUMAN
MICROVASCULAR ENDOTHELIAL CELL- LINE-1) 63 2.10.2.
ENDOTHELZELLAKTIVIERUNG 64 2.11. MEMBRANPERMEABILITAET VON ENDOTHELZELLEN
65 PLAETTCHENAKTIVIERUNG 83 3. ERGEBNISSE 67 3.1. DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
UNTERSUCHUNGEN ZUM EINFLUSS VON DEFENSIN AUF DIE THROMBOZYTENAKTIVIERUNG
67 3.1.1. FIBRINOGENBINDUNG AN GELFILTRIERTE PLAETTCHEN INDUZIERT DURCH
KLASSISCHE AGONISTEN UND ALPHA DEFENSINE 67 3.1.2. FIBRINOGENBINDUNG AN
GELFILTRIERTE PLAETTCHEN VERSCHIEDENER TIERARTEN 70 3.1.3.
FIBRINOGENBINDUNG AN THROMBOZYTEN NACH HNP AKTIVIERUNG IM PRP. 72 3.1.4.
FIBRINOGENBINDUNG AN THROMBOZYTEN NACH BETA-DEFENSIN AKTIVIERUNG BEI
GELFILTRIERTEN PLAETTCHEN 74 3.1.5. ZEITKINETIK 75 3.1.6.
A-GRANULA-SEKRETION 75 3.1.7. *DENSE-BODIES -SEKRETION 76 3.1.8. BINDUNG
DESTSP-1 AN DIE PLAETTCHENOBERFLAECHE 77 3.1.9. CD40 LIGAND EXPRESSION DER
THROMBOZYTEN 77 3.1.10. AUSBILDUNG DES PROKOAGULANTEN ZUSTANDS 78
3.1.11. MIKROPARTIKELFORMATION 80 3.1.12. UNTERSUCHUNGEN ZUM EINFLUSS VON
HNP 1-3 IM CITRAT- ANTIKOAGULIERTEM VOLLBLUT 82 3.2. EINFLUSS
VERSCHIEDENER PROTEINE AUF DIE HNP INDUZIERTEN 4.2. HEMMUNG DER
DEFENSINWIRKUNG 113 3.2.1. EINFLUSS VON ATIII AUF DIE HNP INDUZIERTE
THROMBOZYTENAKTIVIERUNG 83 3.2.2. EINFLUSS VON HIRUDIN AUF DIE HNP
INDUZIERTE THROMBOZYTENAKTIVIERUNG 85 3.2.3. EINFLUSS VON ALPHA 2
MAKROGLOBULIN AUF DIE HNP INDUZIERTE THROMBOZYTENAKTIVIERUNG 86 3.2.4.
EINFLUSS VON A1 ANTITRYPSIN 87 3.2.5. EINFLUSS VON ADHAESIONSPROTEINEN 88
3.2.6. EINFLUSS VON PROSTAGLANDINEN 89 3.2.7. EINFLUSS VON ALBUMIN 91
3.2.8. EINFLUSS VON BACITRACIN 91 3.3. ELISAVERFAHREN 94 3.3.1. ABGABE
VON LOESLICHEM CD40L INS PLASMA NACH AKTIVIERUNG VON THROMBOZYTEN MIT
HNP-1 94 3.4. EINFLUSS VON HNP AUF DIE THROMBINBILDUNG IN GEGENWART VON
THROMBOZYTEN 95 3.5. EINFLUSS VON HNP-1 AUF ENDOTHELZELLEN 96 3.5.1.
EFFEKTVONC-TERMINALEMTSP-1-PEPTIDRFYWMWK 98 3.5.2. EINFLUSS VON HNP-1 AUF
DIE PERMEABILITAET DER THROMBOZYTENMEMBRAN 99 4. DISKUSSION 101 4.1.
HNP1-3 SIND STARKE PLAETTCHEN- UND ENDOTHELZELLAGONISTEN 101 4.3.
SPEKULATIONEN UEBER DEN WIRKMECHANISMUS DER PLAETTCHENAKTIVIERUNG DURCH
HNPS 118 5. AUSBLICK 123 6. ZUSAMMENFASSUNG 125 7. SUMMARY 128 8.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 131 9. PUBLIKATIONEN 134 9.1. VEROEFFENTLICHTE
ABSTRACTS 134 9.2. MANUSKRIPTE IN BEARBEITUNG 135 10. ERKLAERUNG 136 11.
LITERATURVERZEICHNIS 137
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