Molekulare Faktoren der Entwicklung des Gyrus dentatus bei der Maus

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1. Verfasser: Krämer, Nadine (VerfasserIn)
Format: Abschlussarbeit Buch
Sprache:German
Veröffentlicht: Berlin mbv 2008
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adam_text 3.8.3.1 ERST-STRANG CDNA SYNTHESE 27 INHALTSVERZEICHNIS INHALT ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG 1 2 GRUNDLAGEN UND LITERATURUEBERSICHT 4 2.1 AUFBAU UND ENTWICKLUNG DES GYRUS DENTATUS 4 2.2 AN DEN GYRUS DENTATUS ANGRENZENDE STRUKTUREN 7 2.3 EMX2, EIN MODELLHAFTER TRANSKRIPTIONSFAKTOR DER TELENZEPHALONENTWICLDUNG.. 8 2.4 DIE EMXZ ~ MUTANTE 12 2.4.1 DAS MUTANTE GENKONSTRUKT 12 2.4.2 DEFEKTE IN DER EMXL 1 MUTANTE 13 2.5 WEITERE KOMPONENTEN DER ENTWICKLUNGSKASKADE DES GYRUS DENTATUS UND ENTSPRECHENDE MUTANTEN 14 2.6 STAND DER FORSCHUNG (ZUSAMMENFASSUNG) 15 3 MATERIAL UND METHODEN 16 3.1 GERAETE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 16 3.2 REAGENZIEN, REAKTIONS-KITS UND CHEMIKALIEN 17 3.2.1 REZEPTE 18 3.3 TIERZUCHT UND GEWINNUNG VON EMBRYONALEM HIMGEWEBE 21 3.4 GENOMISCHE DNA-EXTRAKTION 22 3.5 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG MITTELS PHOTOMETER 23 3.6 POLYMERASE-KETTEN-REAKTION (PCR) 23 3.6.1 GENOTYPISIERUNG MITTELS PCR 24 3.7 GELELEKTROPHORESE 25 3.8 MIKROARRAY ANALYSE 26 3.8.1 PRAEPARATION DES HIPPOCAMPUS INKLUSIVE DER GYRUS DENTATUS ANLAGE 26 3.8.2 RNA ISOLIERUNG 26 3.8.3 PRAEPARATION DER ANTISENSERNA (CRNA ODER ARNA) 27 BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/991428285 DIGITALISIERT DURCH INHALTSVERZEICHNIS 3.8.3.2 ZWEIT-STRANG CDNA SYNTHESE 28 3.8.3.3 CDNA AUFREINIGUNG 28 3.8.3.4 IN VITRO TRANSKRIPTION ZUR SYNTHESE DER ARNA 29 3.8.3.5 ARNA AUFREINIGUNG 29 3.8.4 FRAGMENTIERUNG DER ARNA 30 3.8.5 HYBRIDISIERUNG UND SCANNEN DER AFFYMETRIX GENECHIPS 30 3.8.6 ARRAY-DATEN-ANALYSE 31 3.8.7 HIERARCHISCHE GRUPPIERUNG DER MIKROARRAY DATEN 31 3.9 HERSTELLUNG DER RIBOPROBEN FUER DIE IN SITU HYBRIDISIERUNG 33 3.9.1 RNA ISOLIERUNG 33 3.9.2 REVERSE TRANSKRIPTION 33 3.9.3 PRIMER-DESIGN UND PCR 34 3.9.4 RNA-TRANSKRIPTION (DIG LABELING) 36 3.10 KRYOSTAT-SCHNITTE 37 3.11 IN SITU HYBRIDISIERUNG 37 3.11.1 PRAEHYBRIDISIERUNG UND HYBRIDISIERUNG 38 3.11.2 POSTHYBRIDISIERUNG UND ANTIKOERPERINKUBATION 38 3.11.3 WASCHSCHRITTE NACH DER ANTIKOERPERINKUBATION UND FAERBERAKTION 39 3.12 IMMUNHISTOCHEMIE 39 3.13 BRDU-INJEKTIONEN 40 3.14 TUNEL-FAERBUNG (NACHWEIS VON ZELLTOD) 40 4 ERGEBNISSE 41 4.1 RESULTATE DER IN SITU HYBRIDISIERUNGEN 41 4.1.1 RAR2-EXPRESSION IN DER GYRUS DENTATUS ANLAGE 41 4.1.2 UNTERSUCHUNG BEKANNTER GENE IM ENTWICKLUNGSVERLAUF 42 4.1.2.1 DER ETNXZ 1 PHAENOTYP IST NICHT DIE FOLGE EINER ENTWICKLUNGS- VERZOEGERUNG 43 4.1.2.2 DIE PROLIFERATION IN DER EMXL ~ GYRUS DENTATUS ANLAGE IST VERAENDERT 45 4.1.2.3 DIFFERENZIERUNG (PRAENEURALE GENKASKADE DER BHLH GENE) 46 4.1.2. 9 ANHANG 145 INHALTSVERZEICHNIS 4.2 MIKROARRAY RESULTATE 85 4.3 BESTAETIGUNG DER MIKROARRAY RESULTATE 87 4.3.1 GENE, DIE AN ZELLMIGRATION SOWIE AXONENWACHSTUM UND -GUIDANCE BETEILIGT SIND 89 4.3.2 AES-GRG5, HIPK2 UND DIE NOTCH- UND WNT-PFADE 93 4.3.3 IN ANDERE ASPEKTE DER GEHIRNENTWICKLUNG INVOLVIERTE GENE 93 4.3.4 MARKER GENE FUER DIFFERENZIERTE NEURONEN-TYPEN 97 4.3.5 VASKULAERE / ENDOTHELIALE GENE IN DER AEUSSEREN MARGINALZONE 98 4.3.6 CAJAL-RETZIUS ZELL-MARKER IN DER AEUSSEREN MARGINALZONE 99 4.3.7 GLIA-MARKER IN DER AEUSSEREN MARGINALZONE 101 5 DISKUSSION 104 5.1 BEKANNTE GENE IM ENTWICKLUNGSVERLAUF 104 5.1.1 DIFFERENZIERUNG DER NEURONALEN UND GLIALEN VORLAEUFER 104 5.1.2 GESTOERTE MIGRATION IN &ER EMX2~ ~ MUTANTE 107 5.1.3 ENTWICKLUNG DER MARGINALZONEN UND BEDEUTUNG DER /TE/N-EXPRIMIERENDEN ZELLEN 109 5.2 MIKROARRAY-ANALYSE 113 5.2.1 FAKTOREN DER ZELLMIGRATION SOWIE VON AXONALEM WACHSTUM UND AXONALER WEGFMDUNG 113 5.2.2 AES-GRG5, HIPK2 UND DIE BETEILIGUNG DER NOTCH- UND WNT-PFADE 114 5.2.3 ANDERE ASPEKTE DER GEHIMENTWICKLUNG 116 5.2.4 MARKER DER AEUSSEREN MARGINALZONE 117 5.2.5 WEITERFUEHRENDE EXPERIMENTE 120 6 ZUSAMMENFASSUNG 121 7 SUMMARY 123 8 LITERATURVERZEICHNIS 125
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