Wirkung von Pioglitazon und Rofecoxib auf Tumorzellen in vitro
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| adam_text | Titel: Wirkung von Pioglitazon und Rofecoxib auf Tumorzellen in vitro
Autor: Waibel, Heidi
Jahr: 2008
Gliederung
1 Einleitung 11
1.1 Tumorentstehung (Cancerogenese) 11
1.2 Tumortherapie 13
1.2.1 Entwicklungen in der Tumortherapie 13
1.2.2 Chemopräventive Biomodulatoren 15
1.2.2.1 Pioglitazon: Struktur, Rezeptoren und Wirkmechanismen 15
1.2.2.2 PPARy-Agonisten und ihre Stellung in der Tumortherapie 17
1.2.2.2.1 PPARy-Agonisten und Metabolismus 17
1.2.2.2.2 PPARy-Agonisten und Entzündung 18
1.2.2.2.3 PPARy-Agonisten und Differenzierung 18
1.2.2.2.4 PPARy-Agonisten und Zellzyklus 19
1.2.2.2.5 PPARy-Agonisten und Apoptose 20
1.2.2.2.6 PPARy-Agonisten und Angiogenese 20
1.2.2.2.7 PPARy-Agonisten und Metastasierung 22
1.2.2.3 Rofecoxib: Struktur, Rezeptoren und Wirkmechanismen 22
1.2.2.4 Selektive COX-2-Inhibitoren und ihre Stellung in der
Tumortherapie 24
1.2.2.4.1 COX-2-Inhibitoren und Metabolismus 24
1.2.2.4.2 COX-2-Inhibitoren und Entzündung 25
1.2.2.4.3 COX-2-Inhibitoren und Zellzyklus 25
1.2.2.4.4 COX-2-Inhibitoren und Apoptose 26
1.2.2.4.5 COX-2-Inhibitoren und Angiogenese 27
1.2.2.4.6 COX-2-Inhibitoren und Metastasierung 27
1.3 Pasteur-und Warburg-Effekt 28
1.4 Laktat und Azidose: pro- und antitumorale Wirksamkeit 29
1.5 Extrahepatische Produktion von C-reaktivem Protein 31
1.6 Das drei-dimensionale Tumorsphäroid Modell 32
1.7 Aufgabenstellung 34
2 Material und Methoden 35
2.1 Zellbiologische Arbeiten 35
2.1.1 Zellkultur 35
2.1.1.1 Auftauen und Einfrieren von Zellen 35
7
2.1.1.2 Kultivierung von Tumorzelllinien in Normoxie und Hypoxie 35
2.1.1.3 Generierung von Sphäroiden 36
2.1.1.4 Gewinnung von mononukleären Zellen (MNCs) 36
2.1.1.5 Gewinnung von „conditioned medium 37
2.1.2 [3H]Thymidin-Proliferationstest 37
2.1.2.1 [3H]Thymidin-Proliferationstest im Monolayer 37
2.1.2.2 [3H]Thymidin-Proliferationstest im Sphäroid 38
2.1.3 MTT-Proliferationstest im Monolayer 39
2.1.4 Gewinnung von Überständen 39
2.1.5 IL-6- und CRP-ELISA 40
2.1.6 pH-Bestimmung 40
2.1.7 Laktatbestimmung 41
2.1.8 Durchflusszytometrie 41
2.2 Molekularbiologische Arbeiten 42
2.2.1 RNA-Gewinnung und Quantifizierung 42
2.2.2 Qualitative Gelelektrophorese von RNA 43
2.2.3 Qualitative Gelelektrophorese von DNA 44
2.2.4 Reverse Transkription 44
2.2.5 Polymerase-Kettenreaktion 45
3 Ergebnisse 47
3.1 Expression von C-reaktivem Protein in Tumorzelllinien 47
3.2 Interleukin-6-Expression von Tumorzellen im Zytokin-ELISA 49
3.3 Proliferationshemmung von Tumorzellen durch Pioglitazon und
Rofecoxib 50
3.3.1 Mikroskopie und Fotografie 50
3.3.2 [3H]-Thymidin-Proliferationstest im Monolayer 52
3.3.2.1 Proliferation unter Normoxie-Bedingungen 52
3.3.2.2 Proliferation unter Hypoxie-Bedingungen 54
3.3.3 [3H]-Thymidin-Pro!iferationstest im Sphäroid 56
3.3.4 MTT-Proliferationstest im Monolayer 58
3.3.5 Durchflusszytometrische Bestimmung der Fraktion toter und apoptotischer
Zellen 60
3.3.6 pH-Messung im Überstand 65
3.3.7 Laktat-Messung im Überstand 66
8
4 Diskussion 69
4.1 Nachweis der Expression von C-reaktivem Protein in Tumorzellen 69
4.2 Antiproliferative Wirkung von Pioglitazon und Rofecoxib auf
unterschiedliche Tumorzelllinien im Vergleich 70
4.3 Beeinflussung der Wirkung von Pioglitazon und Rofecoxib durch Variation
der Zellkulturbedingungen 72
4.3.1 Normoxie versus Hypoxie 73
4.3.2 Zellkultur im Monolayer versus Kultur im Sphäroid 74
4.4 [3H]-Thymidin-Proliferationstest versus MTT-Proliferationstest 75
4.5 Apoptose, Zellzyklusarrest oder Zytotxizität? Grundlage der
antiproliferativen Wirkung von Pioglitazon und Rofecoxib 77
4.6 Antitumorale Aktivität von Pioglitazon und Rofecoxib durch Modulation
des Tumorzellstoffwechsels? 78
4.7 Rofecoxib: freiwillige weltweite Marktrücknahme 80
5 Zusammenfassung 83
6 Anhang 87
6.1 Abbildungsverzeichnis 87
6.2 Tabellenverzeichnis 88
6.3 Literaturverzeichnis 89
9
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