Die Aktivierung der MKK6/p38 mapk Kaskade induziert SOCS3-Genexpression und hat einen inhibitorischen Effekt auf die IL-6-abhängige Transkription
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Autor: Correia Freitas, Carlos A.
Jahr: 2007
I
1. Einleitung 1
1.1. Zytokine, allgemein 1
1.2. Interleukin-6 2
1.2.1. Aufbau 2
1.2.2. Funktion 2
1.3. Der Interleukin-6 Signalweg 4
1.3.1 Der Rezeptor 4
1.3.2 Interleukin-6 Signaltransduktion 5
1.3.2.1. Jak/STAT 5
1.3.2.2. MAP-Kinasen-Kaskaden 6
1.4. Negative Regulation des IL-6 Signalweges 8
1.4.1. Proteininhibition of activated STAT (PIAS) 8
1.4.2. Protein Tyrosine Phosphatase (PTP-Proteine) 8
1.4.3. Familie der Supressor Of Cytokine Signaling (SOCS) 9
1.5. Cross-Talk der Signalwege 10
1.6. Zielsetzung und Fragestellung der Arbeit 12
II
2. Material und Methoden 13
2.1. Materialien 13
2.1.1. Chemikalien und Verbrauchsmaterialien 13
2.1.2. Kulturmedien 13
2.1.3. Puffer und Medien 14
2.1.4. Vektoren 15
2.1.5. Zytokine / Zytokininhibitoren 16
2.1.6. Firmengebrauchs-Kit s 17
2.1.7. Restriktionsenzyme 17
2.1.8. Zelllinien 18
2.1.9. Bakterien 18
2.2. Methoden 19
2.2.1. Kultivierung und Zellsplitting der eukaryonten Zelllinien 19
2.2.2. Reporter Gene Assay 19
2.2.3. Quantitative Auftrennung von Gesamt-RNA 21
2.2.4. Northern-Blot und Hybridisierung 21
2.2.5. Polymerase-Kettenreaktion (PCR) 22
2.2.6. Single Shot E. coli BakterienTransformation 23
2.2.7. DNA-Isolierung 23
2.2.8. Konzentrationsbestimmung 23
2.2.9. Argarosegelelektrophorese 23
2.2.10 Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) 24
2.2.11 Immune Complex Kinase Assay 24
2.2.12 Zellen-Vitalitätsnachweis durch LDH-Bestimmung 25
III
3. Ergebnisse 26
3.1. IL-6 abhängige Aktivierung des
MKK6/P3 W Signalweges 26
3.2. P38MAPK und MKK6 haben einen Effekt
auf die IL-6 induzierte STAT1- und
STAT3-Aktivierung 27
3.3. Einfluss der p3SUAPK auf die IL-6-
induzierte Promotor-Aktivierung 28
3.4. Die Aktivierung des MKK6/p38*APK
Signalweges beeinflusst die SOCS3
mRNA Induktion 31
3.5. Beeinflussung der SOCS3 Promotor
Aktivierung durch die
MKK6/p38MAPK Kaskade 32
IV
4. Diskussion 34
5. Zusammenfassung der Ergebnisse 37
6. Literaturverzeichnis 38
7. Danksagung 46
8. Lebenslauf 47
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