Nachweis von Candida albicans und Bestimmung der Candida spezifischen Immunglobuline IgA und IgG im Vaginalsekret bei Frauen mit Verdacht auf chronisch rezidivierende Vulvovaginalcandidose
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Seite
Abkürzungen
1. Einleitung und Fragestellung 9
1.1. Einleitung 9
1.2. Problemstellung 16
2. Material und Methode 17
2.1. Material 17
2.2. Patientinnen 17
2.2.1. Studiengruppe 17
2.2.2. Vaginalabstriche 19
2.3. Kulturen 20
2.3.1. Material 20
2.3.2. Anlegen von Pilzkulturen 20
2.4. DNA-Freisetzung 22
2.4.1. Material 22
2.4.2. DNA-Extraktion 23
4
2.5. Candida PCR 24
2.5.1. Material 24
2.5.2. Candida-Primer 25
2.5.3. Durchführung der PCR 25
2.5.4. Enzymatisches Schneiden der DNA 26
2.5.4.1. Material 26
2.5.4.2. Durchführung 27
2.6. Gelelektrophorese 27
2.6.1. Material 27
2.6.2. Durchführung 28
3. Enzym-Linked-Immuno-Sorbent-Assay (ELISA) 29
3.1. Material 29
3.2. Bestimmung der candidaspezifischen ClgA und ClgG 29
3.2.1. Reagenzien zur Bestimmung der Konzentration von candidaspezifischen
ClgA und ClgG im Vaginalabstrich 29
3.2.2. Gepufferte Waschlösung 30
3.2.3. Durchführung 30
3.2.4. Auswertung 33
4. Ergebnisse 35
5
4.1. Candidanachweis 35
4.1.1. Kultur 35
4.1.2. PCR 37
4.1.3. Vergleich Kultur/PCR 40
4.2. Auswertung des ELISA 42
4.2.1. Ergebnisse der Bestimmung von candidaspezifischen ClgA und ClgG 42
4.2.2. PCR und ELISA - Ergebnisse im Vergleich 43
5. Diskussion 48
6. Zusammenfassung 61
7. Literaturverzeichnis 64
8. Anhang 85
8.1. Geräte 85
8.2. Datentabelle 86
8.3. Nukleotiden - Sequenzen 91
Danksagung 93
Lebenslauf 94
6
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