Etablierung eines Modells zur Untersuchung der Thrombozyten-Endothelzell-Interaktion und zur Analyse von P-Selektin in der synovialen Mikrozirkulation bei der Antigen-induzierten-Arthritis der Maus mittels Fluoreszenzmikroskopie in vivo
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1 EINLEITUNG 5
1.1 Rheumatoide Arthritis (RA) 5
1.1.1 Klinik und Prävalenz 5
1.1.2 Pathogenese der RA 6
1.1.3 Therapie der RA 8
1.1.4 Pharmakologische Therapie der RA 8
1.1.5 Bedeutung der Thrombozyten im Rahmen der RA 10
2 ZIELSETZUNG DER STUDIE 16
3 METHODIK 17
3.1 Modelletablierung 17
3.1.1 Versuchstiere 17
3.1.2 Antigen-induzierte-Arthritis (AiA) 17
3.1.3 Thrombozytenpräparation 19
3.1.4 Intravitale Fluorezensmikroskopie 20
3.1.5 Praktische Durchführung der Versuche 24
3.1.6 Versuchsprotokoll 27
3.2 Analyse der Bedeutung von P-Selektin in der synovialen Mikrozirkulation
am Modell der AiA 27
3.2.1 Allgemeiner Teil 27
3.2.2 Praktische Durchführung der Versuche 29
3.2.3 Versuchsprotokoll 30
3.2.4 Immunhistologie 31
4 STATISTISCHE AUSWERTUNG 32
5 ERGEBNISSE 33
5.1 Modelletablierung 33
5.1.1 Klinische und histologische Beurteilung 33
5.1.2 Durchfiusszytometrie 35
5.1.3 Makro- und Mikrohämodynamische Parameter 37
5.1.4 Leukozyten-Endothelzell-Interaktion 37
5.1.5 Thrombozyten-Endothelzell-Interaktion 39
-3-
5.2 . Analyse der Bedeutung von P-Selektin in der synovialen Mikrozirkulation
am Modell der AiA der Maus 42
5.2.1 Klinische und histologische Beurteilung 42
5.2.2 Makro- und Mikrohämodynamische Parameter 44
5.2.3 Leukozyten-Endothelzell-Interaktion 45
5.2.4 Thrombozyten-Endothelzell-Interaktion 46
5.2.5 Immunhistologie 48
6 DISKUSSION 51
6.1 Grundlagen 51
6.2 Diskussion der Methoden 52
6.2.1 Die Antigen-induzierte-Arthritis der Maus 52
6.2.2 Einsatz der Intravitalmikroskopie zur Beurteilung der Leukozyten-
und der Thrombozyten-Endothelzell-Interaktion 53
6.2.3 Thrombozytenseparation 54
6.2.4 Thrombozyten-Endothelzell-Interaktionen bei der AiA 55
6.2.5 Analyse der Bedeutung von P-Selektin in der synovialen
Mikrozirkulation am Modell der AiA der Maus 57
7. ZUSAMMENFASSUNG 61
8. LITERATURVERZEICHNIS 64
9. ABBILDUNGSVERZEICHNIS 75
-4-
9. ABBILDUNGSVERZEICHNIS
Abbildung 1 Interaktion von Makrophagen, Fibroblasten und T-Zellen 7
Abbildung 2 Plättchenadhäsion an Endothel 13
Abbildung 3 Struktur von P-Selektin und PSGL-1 (Patrick, 2004) 14
Abbildung 4 Ablauf der Antigen-induzierten Arthritis 19
Abbildung 5 Intravitalmikroskopie 22
Abbildung 6 Schematische Seitenansicht der Präparation zur
Intravitalmikroskopie am Kniegelenk der Maus 25
Abbildung 7 Kniegelenksdurchmesser 34
Abbildung 8 Körpergewicht 35
Abbildung 9 Durchflußzytometrie der separierten Thrombozyten:
Repräsentativer Dot Plot der separierten Thrombozyten 36
Abbildung 10: Rollende Leukozyten 38
Abbildung 11 Adhärente Leukozyten 38
Abbildung 12 Intravital-Fluoresenzbilder 39
Abbildung 13 Rollende Thrombozyten am Tag 7 der Ai A-Gruppe 40
Abbildung 14 Adhärente Thrombozyten am Tag 7 der Ai A-Gruppe 41
Abbildung 15 Kniegelenksdurchmesser 43
Abbildung 16 Rollende Leukozyten 45
Abbildung 17 Adhärente Leukozyten 46
Abbildung 18 Rollende Thrombozyten 47
Abbildung 19 Adhärente Thrombozyten 48
Abbildung 20 Immunhistologie 49
-75-
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