Snail-regulierte Gene im malignen Melanom
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2007
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Inhaltsverzeichnis
1 Zusammenfassung 4
2 Einleitung 5
2.1 Das maligne Melanom 5
2.1.1 Allgemeines 5
2.1.2 Pathogenese 5
2.1.3 Klassifikation 6
2.1.4 Prävention und Früherkennung 8
2.1.5 Therapie des malignen Melanoms 9
2.1.6 Einschätzung der Prognose des malignen Melanoms nach der Clark-Skala
10
2.2 Transkriptionsfaktoren 11
2.2.1 Genom und Proteinstruktur von Snail 11
2.2.2 Der Transkriptionsfaktor Snail und seine Aufgaben in der Embryogenese.. 12
2.2.3 Bedeutung von Snail bei der EMT und der Tumorprogression 13
2.3 Zelladhäsion 15
2.3.1 Genom und Proteinstruktur von E-Cadherin 16
2.3.2 E-Cadherin und seine allgemeinen Aufgaben 16
2.3.3 Bedeutung von E-Cadherin bei der Tumorprogression 17
2.4 Die Regulation von E-Cadherin durch Snail im malignen Melanom 18
2.5 Zielsetzung: Der Einfluss von Snail und E-Cadherin auf die Genexpression 19
3 Material 20
3.1 Puffer, Medien und Lösungen 20
3.1.1 Zellinien 20
3.1.2 Zellkultur und Nährmedien 20
3.1.3 Antibiotika 21
3.1.4 Pufferund Lösungen 21
3.1.5 Lösungen für Western Blot 23
3.1.6 Enzyme 23
3.2 Spezielle Artikel 23
3.3 Geräte ZZZZZZZZZZZZZZZZZZZ. 26
3.4 Oligonukleotide und Vektoren 28
3.4.1 Oligonukleotide 28
3.4.2 Vektoren 29
4 Methoden 30
4.1 Zellkultur-Methoden 30
4.1.1 Zellkultivierung. ...30
4.1.2 Isolierung von Plasmid-DNA 30
4.1.3 Transfektion von Zellen ..31
4.1.4 Isolation von RNA aus Zellen ....32
4.2 Molekularbiologische Methoden 32
4.2.1 Reverse Transkription ZZZ. 32
4.2.2 Polymerase Kettenreaktion (PCR) ZZ. . 33
4.2.3 Quantitative Echtzeit-PCR 34
4.2.4 Gelelektrophorese von DNA 35
4.3 Proteinchemische Methoden 35
4.3.1 Herstellung von Gesamtproteinextrakten ZZZZZZZZZZZZZZZZZ...35
2
4.3.2 BCA-Konzentrationsbestimmung 36
4.3.3 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese 36
4.3.4 Western Blot undProteindetektion 37
4.4 cDNA-Array 39
5 Ergebnisse 40
5.1 Vorarbeiten 40
1.I.1 Transfektion der Zelllinie Mel Im mit as Snail 40
5.1.2 cDNA-Array mit Mel Im- undas Snail 5-Zellen 40
5.2 Der Einfluss von Snail auf die Expression von E-Cadherin 43
5.3 Der Einfluss von Snail und E-Cadherin auf die Expression von Osteonectin 45
5.4 Die Regulation von MMP 2 durch Snail und E-Cadherin 49
5.5 Die tPA-Expression unter Snail und E-Cadherin 52
5.6 Regulation der Expression von T1MP 1 55
5.7 Einfluss von Snail und E-Cadherin auf die EMMPRIN-Expression 58
5.8 Expression von Rho A 61
5.9 Die Regulation von NM 23b 64
5.10 Vimentin-Expression unter dem Einfluss von Snail und E-Cadherin 68
5.11 Regulation von Notch 4 durch Snail und E-Cadherin 72
5.12 Der Einfluss von Snail und E-Cadherin auf die Expression von TRIP 75
5.13 Zusammenfassende Darstellung der Ergebnisse 79
6 Diskussion 81
6.1 Genregulation von Osteonectin 81
6.1.1 Allgemeine Funktionen von Osteonectin und seine Bedeutung im Tiermodell
81
6.1.2 Die Rolle von Osteonectin beim malignen Melanom 82
6.2 Snail reguliert wichtige Spieler im Matrixmetalloproteinasen-Komplex wie
MMP2 84
6.2.1 Allgemeine Aufgaben von MMP 2 84
6.2.2 MMP 2 im malignen Melanom 85
6.3 tPA reguliert in Abhängigkeit von Snail die Zellmigration 87
6.3.1 Allgemeine Funktionen von tPA 87
6.3.2 tPA im malignen Melanom 88
6.4 TIMP 1 als wichtiger Regulator der MMP-Aktiverung 91
6.4.1 Allgemeine Funktionen von TIMP 1 91
6.4.2 TIMP 1 im malignen Melanom 91
6.5 Die Expression von EMMPRIN als Prognosefaktor im malignen Melanom 92
6.5.1 Allgemeine Funktionen von EMMPRIN 92
6.5.2 Die Rolle von EMMPRIN im malignen Melanom 93
6.6 Rho A als wichtigster Vertreter der Rho-GTPasen beim malignen Melanom 94
6.6.1 Allgemeines zu Rho A 94
6.6.2 Funktion von Rho A beim malignen Melanom 95
6.7 NM 23 als günstiger Prognosefaktor bei vielen Malignomen 96
6.7.1 Allgemeine Funktionen von NM23 96
6.7.2 NM23 als Tumormarker beim malignen Melanom 97
6.8 Vimentin als mesenchymaler Marker 98
6.8.1 Allgemeine Aufgaben von Vimentin 98
6.8.2 Vimentin Expression in Melanomzellen 99
6.9 Ein weiterer Spieler im EMT-Komplex: Notch 4 100
6.9.1 Allgemeine Aufgaben von Notch 100
6.9.2 Die Expression von Notch bei maligen Erkrankungen 101
3
6.10 Unterdrückung der Apoptoseeinleitung durch TRIP 102
6.10.1 Allgemeine Bedeutung von TRIP 102
6.10.2 Die Wirkung von TRIP bei malignen Erkrankungen 103
6.11 Genregulation durch Snail 104
7 Abkürzungsverzeichnis 107
8 Literaturverzeichnis 109
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