Die Expression des für neuronale Vorläuferzellen spezifischen Gens Doublecortin eine RT-PCR Studie
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Zusammenfassung 5
1 Einleitung 6
1.1 Die Entstehung der Hirnrinde beim Menschen: Proliferation, Migration und
Differenzierung 7
1.2 Molekulare Grundlagen und Migrationsmechanismen 11
1.3 Störungen der neuronalen Migration 16
1.4 Das Doublecortin-Gen und sein Protein 22
1.5 Die Rolle von Doublecortin bei der neuronalen Migration 23
1.6 Die Expression von Doublecortin während der Embryogenese und im adulten
Gehirn: Doublecortin als Neurogenese-Marker 28
2 Material und Methoden 31
2.1 Präparation und Gewichtsbestimmung der Gehirnregionen 31
2.2 RNA-Isolierung und Quantifizierung 32
2.3 Reverse Transkription (RT) 33
2.4 Real-Time Quantifizierung 34
2.4.1 Primer-Design 34
2.4.2 Herstellung der Standards für die Real-Time-PCR 35
2.4.3 Ermittlung der optimalen Temperatur für die Fluoreszenzmessung 37
2.4.4 Quantifizierung der cDNA mittels Real-Time-PCR 37
2.4.5 Normalisierung 38
2.5 Statistische Auswertung 39
2.6Sodium-dodecyl-sulfat-PolyacryIamid-Gelelektrophorese(SDS-PAGE)/YVestern-
Blot 39
2.6.1 Proteinisoliening und Quantifizierung 39
2.6.2 SDS-PAGE und Western-Blot 39
3 Ergebnisse 41
3.1 Ergebnisse der Vorversuche zur Real-Time-RT-PCR 42
3.1.1 Ergebnisse aus der Priiparation und Gewichtsbestimmung der Gehiniregionen 42
3.1.2 Ergebnisse der RNA-Quantifizierung 43
3.1.3 Ergebnisse bei der Herstellung der Standardgeraden 44
3.1.4 Schmelzkurven zur Ermittlung der optimalen Temperatur zur Fl uoreszenzmessung
44
3.2 Ergebnisse der Rcal-Timc-RT-PCR 46
3.3 Auswertung der Ergebnisse 50
3.3.1 Das DOY-Expressionsmusler auf Ebene dermRNA im adulten Nagergehirn 50
3.3.2 Vergleich des DCA-Expressionsmusters bei Wildtyp- und transgenen Mäusen 51
3.3.3 Vergleich des DCY- und /TGFP-Expressionsmusters bei den transgenen Mäusen 52
3.3.4 Vergleich der DCY- und £GF/ -Expressionsmuster auf mRNA- und Proteinebene
53
4 Diskussion 54
4.1 Ziele und Ergebnisse 54
4.2 Adulte Neurogenese 55
4.3 Hohe DCX-Spiegel im Kortex 56
4.3.1 Neurogenese im adultcn kortex 57
4.3.2 DCX und die Plastizität des Gehirns 60
4.3.3 Methodiseh bedingter Erklärungsversuch 61
4.3.4 Regulation der DCY-Expression auf Ebene der Translation 62
4.4 Schlussfolgerungen 64
Abkürzungsverzeichnis 66
Literaturverzeichnis 68
Danksagung 86
Curriculum vitae 87
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