Melatoningehalt in marinen Makroalgen Entwicklung und Validierung quantitativer Bestimmungen mittels HPLC und enzymgekoppeltem Immunoassay
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Bremen
Kamloth
2004
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| adam_text | - 3 R R MELATONINGEHALT IN MARINEN MAKROALGEN. ENTWICKLUNG UND
VALIDIERUNG QUANTITATIVER BESTIMMUNGEN MITTELS HPLC UND ENZYMGEKOPPELTEM
IMMUNOASSAY. MELATONIN IN MARINE MACROALGAE. DEVELOPMENT AND VALIDATION
OF QUANTITATIVE DETERMINATIONS BY HPLC AND ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT
ASSAY CARSTEN PAPE BER. POLARFORSCH. MEERESFORSCH. 473 (2004) ISSN
1618-3193 INHALTSVERZEICHNIS I.) INHALTSVERZEICHNIS 1 ZUSAMMENFASSUNG 7
2 SUMMARY 10 3 EINLEITUNG 13 4 MATERIAL UND METHODEN 24 4.1
VERSUCHSORGANISMEN 24 4.1.1 PORPHYRA UMBILICALIS (L.) J. AG 24 4.1.2
ULVA LACTUCA (L) 24 4.1.3 LAMINARIA SACCHARINA (L.) LAMOUR 24 4.1.4
PALMARIA PALMATA (L) O. KUNTZE 25 4.1.5 KAPPAPHYCUS ALVAREZII (DOTY)
DOTY 25 4.1.6 PTERYGOPHORA CALIFORNICA (RUPR.) 25 4.1.7 LYCOPERSICON
ESCULENTUM (MILL.) 25 4.2 PROBENAUFARBEITUNG 26 4.2.1 EXTRAKTION MIT
PERCHLORSAEURE,.....,,.... 26 4.2.2 EXTRAKTION MIT EINEM
ACETON-METHANOL-GEMISCH 27 4.2.3 EXTRAKTION MIT ETHER 27 4.2.4
FESTPHASENEXTRAKTION ....: 28 4.3 BESTIMMUNG DES MELATONINGEHALTS DURCH
HOCHDRUCKFLUESSIGKEITS- CHROMATOGRAPHIE (HPLC) MIT FLUORESZENZDETEKTION
29 4.3.1 HPLC ZUR DIREKTEN MESSUNG DES MELATONINS (HPLC-1) 29 4.4
EXTRAKTION DES MELATONINS AUS HPLC-1-FRAKTIONEN 30 4.5 MESSUNG VON
MELATONIN NACH VORSAEULEN-DERIVATISIERUNG 32 4.5.1 DERIVATISIERUNG DES
MELATONINS 32 4.5.2 HPLC ZUR FLUOROMETRISCHEN MESSUNG DES
MELATONINDERIVATS (HPLC-2) 33 4.6 BESTIMMUNG VON MELATONIN MITTELS
ENZYM-GEKOPPELTEM IMMUNOASSAY (ELISA) 33 4.6.1 PROTOKOLL FUER
ELISA-MESSUNGEN 34 4.7 STANDARD-LOESUNGEN 34 4.8 BESTIMMUNG DER AUSBEUTE
35 4.9 VERGLEICH VON EXTRAKTIONSMETHODEN 35 1 INHALTSVERZEICHNIS 4.10
EINFLUSS DER LICHTINTENSITAET WAEHREND DER AUFARBEITUNG 36 4.11
TAG-NACHT-VERGLEICHE 36 4.12 EINFLUSS DER OCTANSULFONSAEURE-KONZENTRATION
AUF DIE RETENTIONS- ZEITEN VERSCHIEDENER TRYPTOPHANMETABOLITE IM
HPLC-1-SYSTEM 37 4.13 FLUORESZENZSPEKTREN 37 4.14 IMMUNOREAKTIVITAET IN
HPLC-FRAKTIONEN UM DEN MELATONIN-PEAK 38 4.15 EINFLUSS DER
MOERSERINTENSITAET 38 4.16 STABILITAET BEIM TIEFFRIEREN 38 4.17 TAGESGANG
BEI PORPHYRA 39 4.18 KREUZREAKTIVITAET MIT N-ACETYLTRYPTAMIN 39 4.19
CHEMIKALIEN 40 4.20 STATISTISCHE AUSWERTUNG 40 5 ERGEBNISSE 41 5.1
MESSUNG VON SYNTHETISCHEM MELATONIN 41 5.1.1 MESSUNG VON MELATONIN DURCH
HOCHDRUCKFLUESSIGKEITS- CHROMATOGRAPHIE MIT FLUORESZENZDETEKTION (HPLC-1)
41 5.1.2 AUFFANGEN DER MELATONINFRAKTION VON HPLC-1-LAEUFEN 45 5.1.3
MESSUNG VON MELATONIN DURCH ENZYM-GEKOPPELTEN IMMUNOASSAY 45 5.1.4
QUANTIFIZIERUNG VON MELATONIN NACH VORSAEULENDERIVATISIERUNG... 49 5.2
MESSUNG VON MELATONIN IN EXTRAKTEN VON MAKROALGEN 52 5.2.1 DIREKTE
MESSUNG VON MELATONIN IN ALGENEXTRAKTEN DURCH
HOCHDRUCKFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE MIT FLUORESZENZDETEKTION 52 5.2.2
MESSUNG VON MELATONIN IN ALGENEXTRAKTEN DURCH ENZYM- GEKOPPELTEN
IMMUNOASSAY NACH PRAEPARATIVER HPLC (LC-ELISA) 56 5.2.4 KORRELATION
ZWISCHEN QUANTIFIZIERUNGEN DES MELATONINGEHALTS DURCH ELISA UND
HOCHDRUCKFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE NACH VORSAEULENDERIVATISIERUNG IN
HPLC-AUFGEREINIGTEN EXTRAKTEN 62 5.3 EXTRAKTION VON MELATONIN AUS
MAKROALGEN 64 5.3.1 VERGLEICH DER EXTRAKTIONSMETHODEN SOWIE ZWISCHEN
HPLC- AUFGEREINIGTEN UND DIREKTEN ELISA-QUANTIFIZIERUNGEN 64
INHALTSVERZEICHNIS 5.3.2 STABILITAET DES MELATONINS IN ALGENPROBEN
WAEHREND DER LAGERUNG BEI -80C UNTER LICHTAUSSCHLUSS 67 5.3.3 EINFLUSS
DES ZELLAUFSCHLUSSES AUF DIE GEFUNDENEN MELATONINKONZENTRATIONEN UND AUF
DIE WIEDERFINDUGSRATEN ZUGESETZTEN MELATONINSTANDARDS 68 5.3.4 EINFLUSS
DER BELEUCHTUNGSSTAERKE WAEHREND DER AUFARBEITUNG AUF DIE BEOBACHTETEN
MELATON INWERTE 70 5.4 MELATONIN IN MARINEN MAKROALGEN UNTER
CHRONOBIOLOGISCHEN GESICHTSPUNKTEN 71 5.5 MELATONIN IN LYCOPERSICON 74 6
DISKUSSION 78 7 LITERATURVERZEICHNIS 89 8 DANKSAGUNG 103
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