Fettsäuren-vermittelte Effekte auf die Insulinproduktion an der Insulinomzelllinie INS-1
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| Veröffentlicht: |
2006
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1. ABKÜRZUNGEN 11
2. EINLEITUNG 13
2.1 Medizinhistorische Aspekte des Diabetes mellitus bis zur Entdeckung
des Insulins 13
2.2 Insulinbiosynthese und Insulindegradation unter physiologischen
Verhältnissen 17
2.3 Definition und Klassifikation des Diabetes mellitus 20
2.4 Ätiopathogenese des Typ-2-Diabetes mellitus unter besonderer
Berücksichtigung des lipotoxischen Krankheitsmodells 20
3. ZIELSETZUNG DER ARBEIT UND FRAGESTELLUNG 23
4. MATERIAL UND METHODIK 24
4.1 Material 24
4.1.1 Kultivierungsmedien 25
4.1.2 Radioimmunometrische Quantifizierung von Ratten-C-Peptid 27
4.1.3 Radioimmunometrische Quantifizierung von Ratten-Insulin 28
4.1.4 Lösungen und Puffer 28
4.1.5 Das Ölsäure-Lösungs-Verfahren 29
4.1.6 DiemonoklonaleRatten-Insulinom-ZelllinieINS-1 30
4.2 Methodik 30
4.2.1 Versuchsaufbau 1: Ölsäure-vermittelte Veränderungen für sezerniertes
und intrazelluläres immunreaktives Insulin (DU) und C-Peptid 30
4.2.2 Proteinbestimmung 33
4.2.3 Radioimmunoassay (RIA) 33
4.2.4 Radioimmunometrische Quantifizierung von Ratten-C-Peptid 34
4.2.5 Radioimmunometrische Quantifizierung von immunreaktivem Ratten-
Insulin 34
4.2.6 Konversionsmaß: Immunreaktives Insulin und C-Peptid 35
4.2 7 Versuchsaufbau 2: Radiomarkierungsexperimente mit L-[ S]-Methionin 36
4.2.8 Immunpräzipitation (IP) 38
4.2.9 Alkalische Harnstoffgel-Elektrophorese 40
4.2.10 Trichloressigsäure-Präzipitation(TCP) 42
4.3 Statistik 43
9
5. ERGEBNISSE «
5.1 Ölsäure-vermittelte Kurzzeiteffekte auf Sekretion und Gehalt für
immunreaktives Insulin (IRI)und C-Peptid 44
5.1.1 Ölsäure-vermittelte Kurzzeiteffekte bei 2,8 mM Glukosekonzentration 44
5.1.2 Ölsäure-vermittelte Kurzzeiteffekte bei 5,6 mM Glukosekonzentration 46
5.1.3 Ölsäure-vermittelte Kurzzeiteffekte bei 16,7 mM Glukosekonzentration 48
5.1.4 Ölsäure-vermittelte Kurzzeiteffekte bei 16,7 mM Glukosekonzentration
mit Isobutyl-Methyl-Xanthin 50
5.1.5 Grafische Übersichtsdarstellung der Versuchsergebnisse der Kapitel
5.1.1 bis 5.1.4 52
5.2 Ölsäure-vermittelte Langzeiteffekte auf Sekretion und Gehalt für
immunreaktives Insulin (HU) und C-Peptid 55
5.2.1 Ölsäure-vermittelte Langzeiteffekte bei 2,8 mM Glukosekonzentration 55
5.2.2 Ölsäure-vermittelte Langzeiteffekte bei 5,6 mM Glukosekonzentration 57
5.2.3 Ölsäure-vermittelte Langzeiteffekte bei 16,7 mM Glukosekonzentration 59
5.2.4 Ölsäure-vermittelte Langzeiteffekte bei 16,7 mM Glukosekonzentration
mit Isobutyl-Methyl-Xanthin 61
5.2.5 Grafische Übersichtsdarstellung der Versuchsergebnisse der Kapitel
5.2.1 bis 5.2.4 63
5.3 Ölsäure-vermittelte Veränderungen der Prozessierung von neu¬
synthetisiertem, immunreaktivem Proinsulin 66
5.3.1 Kurzzeiteffekt (Ölsäure-4h) 66
5.3.2 Langzeiteffekt (Ölsäure-24h) 70
6. DISKUSSION 73
7. ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 82
8. LITERATURVERZEICHNIS 85
9. LEBENSLAUF 97
10. DANKSAGUNG 98
10
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