Die Rolle der Lck- und STAT3-Interaktionsmotive des Tip-Onkoproteins in der T-Zelltransformation durch Herpesvirus saimiri
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Inhaltsverzeichnis
I. Zusammenfassung 1
II. Einleitung 2
III. Ziel der Arbeit 9
IV. Material und Methoden 10
1. Material 10
1.1. Reagenzien und Lösungen 10
1.2. Biologisches Material 11
1.3. Vektorsysteme und Ausgangsplasmide 12
1.4. Oligonukleotide 12
1.5. Antikörper und Antiseren 13
1.6. Enzyme 14
1.7. Programme 15
2. Methoden 15
2.1. Zellkulturverfahren 15
2.2. Nukleinsäuremethoden 18
2.3. Proteinmethoden 20
V. Ergebnisse 23
1. Konstruktion von rekombinanten HVS C488 Tip 23
1.1. Mutation des STAT3-Konsensus-Bindungsmotivs 23
1.2. Mutation der Lck-interagierenden Motive 24
1.3. Herstellung Tip-rekombinanter Viren 25
2. Transformation humaner Nabelschnurlymphozyten 26
3. Rekombinante Viren kodierend für weitere Tip-Tyrosin-Varianten 29
3.1. Konstruktion und Überprüfung rekombinanter Viren 29
3.2. Transformation humaner Nabelschnurlymphozyten 30
4. Phänotyp HVS Tip-Y114F-transformierter Lymphozyten 32
4.1. Durchflusszytometrische Charakterisierung 32
4.2. Expression und Phosphorylierung von STAT3 34
4.3. Aktivierungsstatus von STAT1 und STAT3 in transformierten Zellen 34
4.4. Differenzielles Expressions-Profil transformierter Nabelschnurlymphozyten 36
4.5. Transformation antigenspezifischer T-Zellklone mit rekombinantem HVS
Tip-Y114F 42
4.6. Pathogenität der HVS Tip-Y114F-Mutante in Krallenaffen 45
VI. Diskussion 48
VII. Abkürzungen 58
VIII. Literatur 60
IX. Anhang gg
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