In-vitro-Untersuchungen zur Wirkung von PUFAs auf die epitheliale Chloridsekretion
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2004
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
I Inhaltsverzeichnis
I Inhaltsverzeichnis VII
II Abkürzungsverzeichnis XI
III Abbildungsverzeichnis XV
IV Tabellenverzeichnis XIX
1 Einleitung 1
1.1 Resorption und Sekretion von Wasser und Elektrolyten 1
1.1.1 Transportmechanismen 2
1.1.1.1 Membrantransportmechanismen 2
1.1.1.2 Resorption von Wasser und Elektrolyten 2
1.1.1.3 Sekretion von Wasser und Elektrolyten 3
1.1.2 Regulationsmechanismen 5
1.1.2.1 Intrazelluläre Regulation 6
1.1.2.2 Extrazelluläre Regulation 7
1.2 Zellinien als Modell für das Darmepithel 8
1.3 Chloridsekretion der T84-Zellen 12
1.4 Stoffwechsel der Arachidonsäure und ihre Endprodukte 13
1.4.1 Die Grundlagen des Arachidonsäure-Stoffwechsels 13
1.4.1.1 Die Arachidonsäure 13
1.4.1.2 Die Phospholipase A2 14
1.4.1.3 Die Stoffwechselwege der Arachidonsäure 15
1.4.2 Omega-3- und Omega-6-Fettsäuren als Vorläufer der Eicosanoide 17
1.4.2.1 Die Omega-3-Fettsäuren 18
1.4.2.2 Die Omega-6-Fettsäuren 19
1.4.3 Hintergrund der Fettsäurentherapie 19
1.4.3.1 Stoffwechsel der mehrfach ungesättigten Fettsäuren 19
1.4.3.2 Arachidonsäure und Eicosapentaensäure als Konkurrenten um
das Enzymsystem des Arachidonsäure-Stoffwechsels 21
VII
Inhaltsverzeichnis
1.4.3.3 Effekte auf die Eicosanoidsynthese 22
2 Zielsetzung 25
3 Materialien 27
3.1 Chemikalien 27
3.2 Geräte 29
4 Methoden 31
4.1 Zellkultur 31
4.1.1 Kultivierung der T84-Zellen 31
4.1.2 Kultivierung der T84-Zellen für die Ussing-Kammer-Versuche 33
4.1.3 Kultivierung der T84-Zellen für die AA- und EPA-Versuche 33
4.2 Elektrophysiologische Messungen (Ussing-Kammer-Versuche) 34
4.2.1 Elektrophysiologische Grundlagen 39
4.2.2 Bestimmung des Kurzschlußstromes (Isc) 42
4.2.3 Bestimmung des transepithelialen elektrischen Widerstandes (Rter) 42
4.3 Messung des intrazellulären Calziums 43
4.4 Fettsäurenbestimmung 46
4.4.1 Veresterung und Dünnschichtauftrennung 48
4.4.2 Gaschromatographische Untersuchung 50
4.4.3 Statistische Auswertung 59
5 Ergebnisse 60
5.1 Charakterisierung des Fettsäurenmusters intestinaler Epithelzellen in
Abhängigkeit exogen zugeführter n-3- und n-6-Fettsäuren 60
5.2 Regulation der epithelialen Chloridsekretion in Abhängigkeit von n-3-
und n-6-Fettsäuren 64
5.2.1 Die Wirkung von Carbachol, Forskolin und Histamin auf den
Kurzschlussstrom und den transepithelialen Widerstand von T84-
Zelllen und den Caco-2-Zellen 64
5.2.2 Einfluss von NCS auf die Chloridsekretion von T84-Zellen 67
5.2.3 Bestimmung der intrazellulären Ca2+-Konzentration nach
Stimulation der T84-Zellen 70
VIII
Inhaltsverzeichnis
5.2.4 Charakterisierung der Arachidonsäure- und Eicosapentaensäure bei
T84-Zellen 70
5.2.4.1 Einfluss auf den durch Carbachol und Forskolin induzierten
chloridsekretorischen Effekt 71
5.2.4.2 Wirkung von Indomethacin bei einem durch Carbachol und
Forskolin induzierten chloridsekretorischen Effekt 81
6 Diskussion 83
6.1 Regulation der Chloridsekretion 83
6.2 Wirkungsweisen von PUFAs 90
6.3 Identifizierung der Fettsäuren in T84-Zellen mittels der
Gaschromatographie 97
6.4 Beeinträchtigung der intestinalen Barriere in ihrer Austauschfunktion
bei chronisch entzündlichen Darmerkrankungen 99
7 Zusammenfassung 103
8 Literaturverzeichnis 105
IX
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