Verhalten von modifizierten Asbeststäuben in unterschiedlichen zelltoxikologischen Tests
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Gießen
Fachverl. Köhler
2001
|
Schriftenreihe: | Veterinärmedizin
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Schlagworte: | |
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adam_text | Inhaltsverzeichnis
I. Einleitung 1
II Literaturübersicht 2
1 Stoffbeschreibung 2
1.1 Vorkommen, Aufbau und Zusammensetzung von Asbest 2
1.2 Chemische Eigenschaften und Oberflächenbeschaffenheit 3
1.3 Bioresistenz und biologische Verfügbarkeit 3
1.4 Fasergröße und Fasercharakterisierung 5
1.5 Gesundheitsgefährdung durch Asbest 6
1.5.1 Asbestose 6
1.5.2 Mesotheliom 6
1.5.3 Lungenkarzinom 7
2 Toxizitätsmechanismen des Asbests 8
2.1 Zytotoxizität 8
2.2 Fibrogene Wirkung 8
2.3 Mutagene Wirkung und Kanzerogenität 9
3 Oberflächenbehandlung von Asbest 10
3.1 Säurebehandlung 11
3.2 PoIyvinylpyridin-N-oxid(P204) 12
3.3 Surfactant 13
3.4 Leenhin 14
3.5 Andere oberflächenaktive Substanzen 15
4 Tierexperimentelle Untersuchungen 16
5 Zellexperimentelle Untersuchungen 17
5.1 Erythrozyten 17
5.2 Makrophagen 18
5.3 Zellinien 20
6 Reaktive Sauerstoffspezies (ROS) 21
7 Chemilumineszenz 24
III Eigene Untersuchungen 25
A Material und Methoden 25
1 Zellkultivierung 25
1.1 Lungenspülung 25
II. I Spendertiere 25
1.1.2 Präparation der Tiere 26
1.1.3 Spülsysteme 27
1.1.4 Spülflüssigkeit 27
1.1.5 Spülvorgang ¦ 29
1.2 Waschen und Zählen der Zellen , 30
1.3 Zellkultur 31
1.3.1 Zellkulturmedium 31
1.3.2 Einsaat und Anwachsen der Zellen 32
1.3.3 Expositionsmedium 33
1.3.4 Exposition der Zellen 38
1.3.5 Inkubationszeit 39
2 Enzymatische Bestimmung der Lactatdehydrogenase 40
2.1 Testprinzip 40
2.2 Ansatz der Reagenzien 40
2.3 Abnahme und Aufbereitung der Proben 40
2.4 Messung der Lactatdehydrogenase 41
2.5 Auswertung 41
3 Enzymatische Bestimmung des Adenosintriphosphats 43
3.1 Testprinzip 43
3.2 Meßgerät : 43
3.3 Ansatz der ATP-Reagenz 43
3.4 Abnahme und Aufbereitung der Proben 44
3.5 Messung des Adenosintriphosphats 45
3.6 Auswertung 45
4 Chemilumineszenzmessung : 46
4.1 Prinzip 46
4.2 CL-lndikatoren 46
4.2.1 7-Dimethylamino-naphtalin-l,2-dicarbonsäure-hydrazid (DMNH) 46
4.2.2 Lucigenin 47
4.3 Zymosan 47
4.3.1 Zymosan-Ansatz 47
4.3.2 Zymosan-Gebrauchslösung 48
4.4 Chemilumineszenz-Meßgerät 48
4.5 Chemilumineszenz-Meßvorgang 49
4.5.1 Sekundäre Chemilumineszenz 49
4.5.2 Primäre Chemilumineszenz 50
4.6 Auswertung 50
B Ergebnisse der eigenen Untersuchungen 52
1 Lactatdehydrogenase-Freisetzung 52
1.1 Meerschweinchen-Alveolarmakrophagen 52
1.1.1 Einfluß der Staubkonzentration auf die LDH-Freisetzung 52
1.1.2 Einfluß von Surfactant in der Konzentration 20,84 Mg/ml auf die LDH-
Freisetzung 56
1.1.3 Einfluß verschiedener Surfactantkonzentrationen auf die LDH-Freisetzung 62
1.2 Ratten-Alveolarmakrophagen 66
1.2.1 Einfluß der Staubkonzentration auf die LDH-Freisetzung 66
1.2.2. Einfluß von Surfactant in der Konzentration 20,84 ug/ml auf die LDH-
Freisetzung 68
2 Intrazellulärer ATP-Gehalt 72
2.1 Meerschweinchen-Alveolarmakrophagen 72
2.1.1 Einfluß der Staubkonzentration auf den intrazellulären ATP-Gehalt 72
2.1.2. Einfluß von Surfactant in der Konzentration 20,84 ug/ml auf den
intrazellulären ATP-Gehalt 76
2.1.3 Einfluß verschiedener Surfactantkonzentrationen auf den intrazellulären
ATP-Gehalt 82
2.2. Ratten-Alveolarmakrophagen 86
2.2.1 Einfluß der Staubkonzentration auf den intrazellulären ATP-Gehalt 86
2.2.2 Einfluß von Surfactant in der Konzentration 20,84 ug/ml auf den
intrazellulären ATP-Gehalt 88
3 Sekundäre Chemilumineszenz 92
3.1 Meerschweinchen-Alveolarmakrophagen 92
3 1.1 Einfluß der Staubkonzentration auf die sekundäre CL-Aktivität 92
3.2 Ratten-Alveolarmakrophagen 96
3.2.1 Einfluß der Staubkonzentration auf die sekundäre CL-Aktivität 96
3.2.2 Einfluß verschiedener Surfactantkonzentrationen auf die sekundäre
CL-Aktivität 98
4 Primäre Chemilumineszenz 100
4.1 Meerschweinchen-Alveolarmakrophagen 100
4.1.1 Einfluß der Staubkonzentration auf die primäre CL-Aktivität 100
4.1.2. Einfluß der Surfactantkonzentration auf die primäre CL-Aktivität 106
4.2 Ratten-Alveolarmakrophagen 108
4.2.2. Einfluß der Surfactantkonzentration auf die primäre CL-Aktivität 108
A
IV Diskussion 110
1 Methoden 110
1.1 Vergleich der Parameter LDH, ATP und Sekundare CL 110
1.2 Primäre Chemilumineszenz 111
2 Wirkung unterschiedlicher Staubarten 112
2.1 Zytotoxizität verschiedener Staubarten 112
2.2 Primäre Chemilumineszenz verschiedener Staubarten 112
3 Dosisabhängigkeit 113
4 Einfluß der Oberflächenbehandlung 114
4.1 Einfluß der Oberflächenbehandlung auf die Zytotoxizität 115
4.2 Einfluß der Oberflächenbehandlung auf die Sauerstoffradikalbildung 117
5 SurfactanteinfluB 119
6 Tierartspezifische Unterschiede 120
V Zusammenfassung 122
VI Summary 124
VII AbkUrzunesverzeichnis 125
VIII Literaturverzeichnis 126
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