Basiswissen Mikrobiologie Praktikum der Bakteriologie und Mykologie ; mit 54 Tabellen
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Frankfurt am Main
Umschau-Zeitschr.-Verl. Breidenstein
1998
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| Schriftenreihe: | UZV-Fachbuch Medizin
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Vorwort der Autorinnen
Vorwort
I Allgemeiner bakteriologischer Teil
1 Einführung in den praktischen Unterricht/
Teilgebiet Bakteriologie 17
1.1 Ausstattung eines bakteriologischen Arbeitsplatzes 17
1.2 Maßnahmen zur Verhütung von Laborinfektionen 17
2 Sterilisation und Desinfektion 20
2.1 Grundbegriffe 20
2.2 Sterilisation 20
2.2.1 Physikalische Methoden 20
2.2.2 Prüfmethoden 21
2.3 Desinfektion 22
2.3.1 Physikalische Methoden 22
2.3.2 Chemische Wirkstoffe 22
2.3.3 Versuch: Hygienische Händedesinfektion 23
3 Allgemeines zur bakteriologischen Diagnostik und Technik 25
3.1 Morphologie 26
3.1.1 Morphologie und Färbungen 26 °
3.1.2 Wachstumstypie 26
3.2 Biotypie 28 J
3.2.1 Stoffwechselleistungen 28
3.2.2 Gaschromatographie 31
3.2.3 Elektrophorese 33
3.3 Serologische Nachweismethoden 34
3.3.1 Antigen Nachweise 34
3.3.2 Antikörper Nachweise 35
3.4 Lysotypie 35
3.5 Molekularbiologische Methoden des Erregernachweises 36
3.5.1 Hybridisierung mit DNA Sonden Technik 36
3.5.2 Polymerase Ketten Reaktion 38
4 Mikroskopie 40
4.1 Hellfeldmikroskopie 42
4.2 Dunkelfeldmikroskopie 42
4.3 Pflege des Mikroskops 44
7
Inhalt 4.4 Herstellung und Mikroskopieren von Präparaten 45
4.4.1 Benutzung des Bunsenbrenners 45
4.4.2 Impfösen und Impfnadeln 45
4.5 Nativpräparate 47
4.6 Gefärbte Präparate 48
4.6.1 Direktpräparat von Untersuchungsproben oder aus flüssigen
Kulturmedien 48
4.6.2 Anfertigung von Präparaten von angezüchteten Kolonien ... 48
4.6.3 Mikroskopieren gefärbter Präparate 49
4.7 Färbungen 50
4.7.1 Monochromatische Färbungen 51
4.7.2 Polychromatische Färbungen 51
5 Kulturelle Techniken und Züchtungsmethoden 58
5.1 Allgemeines 58
5.2 Chemische Züchtungsbedingungen 59
5.3 Physikalische Züchtungsbedingungen 60
5.4 Züchtungsmethoden 60
5.4.1 Aerobe Kulturverfahren 60
5.4.2 Mikroaerophile Kulturverfahren 60
5.4.3 Anaerobe Kulturverfahren 61
5.5 Wichtige Kulturmedienbestandteile 63
5.5.1 Peptone 63
5.5.2 Fleischextrakte 64
5.5.3 Hefeextrakte 64
5.5.4 Kohlenhydrate 64
5.5.5 Puffersubstanzen 64
5.5.6 pH Indikatoren 65
5.5.7 Selektive Substanzen 65
5.5.8 Agar Agar 65
5.5.9 Gelatine 65
5.6 Herstellung von Trockenkulturmedien 66
5.6.1 Zubereitung 66
5.6.2 Sterilisation 67
5.6.3 Einstellung des pH Wertes 67
5.6.4 Zugabe von Supplement 67
5.6.5 Zugabe von Blutkonserven 68
5.6.6 Gießen von Agarplatten 68
5.6.7 Herstellung von Schrägagarröhrchen 68
5.6.8 Lagerung der Nährböden 69
5.6.9 Qualitätskontrolle der hergestellten Kulturmedien 69
5.6.10 Fehlerquellen bei der Zubereitung von Kulturmedien 69
8
Inhalt
5.6.11 Auswirkungen infolge unzureichender Nährbodenqualität .. 70
5.7 Kulturmedien 70
5.7.1 Feste Nährböden 70
5.7.2 Halbfeste Kulturmedien 71
5.7.3 Flüssige Kulturmedien 71
5.7.4 Komplexe Universal Kulturmedien 72
5.7.5 Selektivkulturmedien 72
5.7.6 Elektivmedien 72
5.7.7 Differenzierungsmedien 72
5.8 Ausgewählte Kulturmedien 73 ¦
5.8.1 Blutagar 73
5.8.2 Kochblutagar 74
5.8.3 Schaedler Agar/Schaedler Bouillon 74
5.8.4 CLED Agar 75}
5.8.5 Mueller Hinton Agar/Mueller Hinton Bouillon 75 C
5.8.6 MacConkey Agar 76
5.8.7 Desoxycholat Citrat Agar (Leifson Agar) 76
5.8.8 Salmonella Shigella Agar (SS Agar) 77
5.8.9 Cefsulodin Irgasan Novobiocin (CIN ) Agar nach Schiemann
(Yersinia Selektivagar) 77
5.8.10 Campylobacter Selektivagar nach Butzler 78
5.8.11 Campylobacter Selektivagar nach Preston 78
5.8.12 Nährboden nach Clauberg 79
5.8.13 Äsculin Galle Agar 79
5.8.14 Hirn Herz Glukose Bouillon 80
5.8.15 Thioglykolat Bouillon 80
5.8.16 Selenit Bouillon 80
5.8.17 Tetrathionat Bouillon 81
5.8.18 Nährboden nach Löwenstein Jensen 81
5.8.19 Nährboden nach Gottsacker 82
5.8.20 Nährboden nach Stonebrink 82
5.8 21 Kulturmedium nach Kirchner 83
5.8.22 Transportmedium nach Stuart 83
6 Verarbeitung von Untersuchungsproben 84
6.1 Urin 85
6.1.1 Mikroskopische Untersuchung 85
6.1.2 Quantitativ kulturelle Untersuchung 85
6.1.3 Prüfung auf antibakteriellc Stoffe im Hemmstoff Test 86
6.1.4 Eintauchkulturen 87
6.2 Liquor 89
6.3 Eiterproben, Exsudate und Wundabstriche 91
9
Inhalt
6.4 Sputum, Tracheal , Bronchialsekret und bronchoalveoläre
Lavage 92
6.5 Nasen , Rachen und Ohrabstriche, Nasennebenhöhlenpunktate 95
6.5.1 Nasen Rachen Abstriche 96
6.5.2 Ohr Abstriche 97
6.5.3 Nasennebenhöhlen Punktate 97
6.6 Stuhl 98
6.7 Galle 100
6.8 Blut 101
6.8.1 Blutkulturmedien 101
6.8.2 Blutkultursysteme 102
6.8.3 Nachweis von Bakterien aus Blutkulturen 103
7 Chemotherapie 105
7.1 Empfindlichkeitsprüfung von schnellwachsenden Bakterien .105
7.2 Methoden der Empfindlichkeitsprüfung von schnellwachsen¬
den Bakterien 106
7.2.1 Reihenverdünnungstest 106
° 7.2.2 Agardiffusionstest 109
7.2.3 Agardilutionstest 113
7.2.4 MHK Bestimmung mit dem Epsilometer Test 113
II Spezieller bakteriologischer Teil
8 Identifizierung von Bakterien 117
8.1 Identifizierung von Micrococcus spp 117
6 8.1.1 Katalase Reaktion 117
8.1.2 Bestimmung der Bacitracin Empfindlichkeit 118
8.1.3 Bestimmung der Lysostaphin Empfindlichkeit 118
8.2 Identifizierung von Staphylococcus spp 119
8.2.1 Nachweis der Katalase Reaktion 122
8.2.2 Nachweis der Plasmakoagulase 122
8.2.3 Latex Agglutinationstest 123
8.2.4 Mannit Kochsalz Phenolrot Agar und Prüfung der Novo
biocin Empfindlichkeit 124
8.2.5 Nachweis der Hyaluronidase 125
8.2.6 Nachweis der Desoxyribonucleasc (DNase) 125
8.3 Identifizierung von Streptococcus spp. und Enterococcus spp. . 127
8.3.1 Bacitracin Test 129
8.3.2 CAMP Test 130
8.3.3 Serologische Gruppenbestimmung nach Lancefield 130
8.4 Identifizierung von Enterococcus spp 131
8.4.1 Äsculin Galle Test 132
10
Inhalt
8.4.2 Nachweis der Reduktion von Methylenblau 132
8.4.3 Pyrrolidonyl Peptidase Nachweis 133
8.4.4 Differenzierung innerhalb der Gattung Enterococcus 133
8.5 Identifizierung von Streptococcus pneumoniae 134
8.5.1 Optochin Test 135 A
8.5.2 Prüfung der Gallelöslichkeit 135
8.6 Identifizierung von Peptococcus spp. und Peptostreptococcus spp. 136
8.7 Identifizierung von Neisseria spp. und Branhamella spp 137
8.7.1 Oxidase Reaktion 139 P
8.7.2 Biochemische Identifizierung durch Kohlenhydratspaltung ..139
8.7.3 Betalaktamase Nachweis 139
8.7.4 Cefinase Blättchen Test 140
8.8 Identifizierung von Listeria spp. und Erysipelothrix rhusiopathiae . 141
8.8.1 Äsculin Hydrolyse 143
8.8.2 H2S Nachweis im Kligler Röhrchen 143
8.8.3 Fermentativer Abbau von Kohlenhydraten 143
8.8.4 Überprüfung der Beweglichkeit 145
8.8.5 CAMP Test 145
8.9 Identifizierung von Korynebakterien 146
8.9.1 Neisser Färbung 148
8.9.2 Harnstoffhydrolyse 148
8.9.3 Fermentation von Kohlenhydraten 149
8.9.4 Cystinase Nachweis 149
8.9.5 Toxinnachweis 150
8.10 Identifizierung von Lactobacillus spp 151
8.11 Identifizierung von Mykobakterien 152
8.11.1 Maßnahmen zur Vermeidung von Infektionen 154
8.11.2 Gewinnung und Transport von Untersuchungsproben 154
8.11.3 Vorbehandlung der Untersuchungsproben 155
8.11.4 Mikroskopie 155
8.11.5 Hellfeldmikroskopie 158
8.11.6 Fluoreszenzmikroskopie 158
8.11.7 Kultureller Nachweis 158
8.11.8 Nährmedien 159
8.11.9 Beimpfung, Bebrütung und Ablesung der Kulturmedien .... 160 ^
8.11.10 Automatisierte Anzucht von Mykobakterien 161
8.11.11 Identifizierung 161
8.11.12 Empfindlichkeitsprüfung bei Mykobakterien 166
8.12 Identifizierung von Aktinomyzeten 167
8.12.1 Norcardia spp 167
8.12.2 Actinomyces spp 168
8.13 Identifizierung von Bacillus spp 169
11
Inhalt 8.13.1 Überprüfung der Beweglichkeit im Nativpräparat 171
8.13.2 Lezithinase Nachweis 171
8.13.3 Quantitativer Nachweis von B. cereus 171
8.14 Identifizierung von Clostridium spp 171
8.14.1 Phosphatase Nachweis 175
8.14.2 Lezithinase und Lipase Nachweis 175
8.14.3 Reverser CAMP Test 176
8.14.4 Hitzetest zum Nachweis von Sporen 176
8.14.5 Toxinnachweis im Mäuseversuch bei Tetanus 176
8.14.6 Toxinnachweis im Mäuseversuch bei Botulismus 177
8.15 Identifizierung von Haemophilus spp 177
8.15.1 Satelliten oder Ammenphänomen 179
8.15.2 Nachweis des Bedarfs an Wachstumsfaktoren 179
8.15.3 Betalaktamase Nachweis 180
8.16 Identifizierung von Pseudomonas spp., S. maltophilia und
Acinetobacter spp 180
8.16.1 Oxidase Test 182
8.16.2 Oxidations und Fermentations Test (OF Test) 182
8.16.3 Nachweis der Bildung von Pyocyanin, Pyorubin und
Fluorescein 183
8.16.4 Gelatinasenachweis 184
8.16.5 Prüfung der Thermoresistenz 184
8.17 Identifizierung von Enterobakterien 185
8.17.1 Fakultativ pathogene Enterobakterien 186
8.17.2 Enteropathogene Bakterien der Gattung Salmonella,
Shigella, Yersinia und Escherichia 192
8.18 Identifizierung von Campylobacter spp 203
8.19 Identifizierung von Helicobacterpylori 207
8.20 Anaerobe gramnegative Stäbchen der Gattungen Bactero
ides spp., Prevotella spp., Fusobacterium spp. und Leptotriehia spp. 208
8.21 Flexible Schraubenbakterien 212
8.21.1 Borrelia spp 212
8.21.2 Treponema spp 213
III Mykologie
9 Allgemeine Hinweise 217
9.1 Ausstattung eines mykologischen Arbeitsplatzes 217
10 Systematik in der medizinischen Mykologie 218
11 Dermatophyten 219
11.1 Materialgewinnung 219
12
Inhalt
11.1.1 Vorgehen bei Verdacht einer Hautmykose 220
11.1.2 Vorgehen bei Verdacht auf Haarbefall 220
11.1.3 Vorgehen bei Verdacht auf Nagelmykose 220
11.1.4 Fehlerquellen bei der Materialentnahme 220
11.1.5 Transport von Untersuchungsproben 221
11.2 Ablauf der Laboruntersuchung 221
11.2.1 Mikroskopische Direktuntersuchung 221
11.2.2 Kulturelle Diagnostik 223
11.2.3 Identifizierung der Dermatophyten 226
11.3 Objektträgerkulturen 227
11.4 Dermatophyten 229
11.4.1 Epidermophyton floccosum 229
11.4.2 Microsporum canis 230
11.4.3 Microsporum gypseum 231
11.4.4 Microsporum audouinii 232
11.4.5 Trichophyton rubrum 233
11.4.6 Trichophyton mentagrophytes 234
WA.7 Trichophyton tonsurans 234
11.4.8 Trichophyton verrucosum 236
12 Hefepilze 237
12.1 Untersuchungsmaterial 239
12.2 Ablauf der Laboruntersuchung 240
12.2.1 Mikroskopischer Direktnachweis 240
12.2.2 Kulturelle Diagnostik 241
12.2.3 Quantitative Untersuchung auf Hefen 242
12.3 Identifizierung der Hefepilze 249
12.3.1 Keimschlauch Test 249
12.3.2 Pseudomyzel und Chlamydosporenbildung auf Reisagar ...250
12.3.3 Biochemische Differenzierung 251
12.4 Candida spp 251
12.4.1 Candida alhicans 252
12.4.2 Candida tropicalis 253
12.4.3 Candida parapsilosis 254
12.4.4 Candida krusei 255
12.4.5 Candida pseudotropicalis 256
12.4.6 Candida guilliermondii 256
12.5 Cryptococcus neoformans 257
12.6 Torulopsis spp 259
12.6.1 Torulopsis glahrata 259
12.7 Rhodutorula spp 260
12.7.1 Rhodutorula ruhra 260
13
Inhalt
12.8 Trichosporon spp 261
12.8.1 Trichosporon cutaneum 261
13 Schimmelpilze 263
13.1 Untersuchungsmaterial 265
13.2 Ablauf der Laboruntersuchung 265
13.2.1 Mikroskopischer Direktnachweis 265
13.2.2 Kulturelle Diagnostik 266
13.3 Identifizierung der Schimmelpilze 266
13.4 Zygomyzeten 267
13.4.1 Mucor spp 267
13.4.2 Rhizopus spp 268
13.4.3 Rhizomucor spp 269
13.5 Aspergillus spp 270
13.5.1 Aspergillus fumigatus 270
13.5.2 Aspergillus niger 271
13.5.3 Aspergillusflavus 272
13.5.4 Aspergillus nidulans 273
13.6 Penicillium spp 274
13.6.1 Penicillium chrysogenum 274
13.7 Scopulariopsis spp 275
13.7.1 Scopulariopsis brevicaulis 276
13.8 Geotrichum spp 276
13.8.1 Geotrichum candidum 277
13.9 Fusarium spp 277
13.9.1 Fusarium oxysporum 277
14 Empfindlichkeitsbestimmung in der Mykologie 279
14.1 Antimykotika 279
14.2 Agardiffusionstest 280
Mykologisches Glossar 282
Weiterführende Literatur 283
Register 284
14
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