Chemisch und enzymatisch modifizierte Umkehrphasen-Trägermaterialien für die HPLC-integrierte Probenaufbereitung
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Autor: Walfort, Andreas
Jahr: 1992
Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung und Aufgabenstellung 1
Micelläre Phasen 5
Einwegvorsäulen in der On-Iine Probenaufbereitung 6
Immunoaffinitäts-Vorsäulen 6
Mixed-Mode-Vorsäulen 6
2. Restricted Access Phasen (RAP) 9
2.1. Definition und Eigenschaften 9
2.2. Unimodale Restricted Access Phasen 10
2.2.1. Die Shielded Hydrophobie Phase (SHP) 10
2.2.2. Die Mixed Functional Phase (MFP) 12
2.3. Bimodale Restricted Access Phasen 15
2.3.1. Proteinbeschichtete Octadecylsilan Phasen 15
2.3.2. Das Konzept des Dual Zone Materials (DZM) 16
2.3.3. Das Konzept der Semi Permeable Surface (SPS) 18
2.3.4. Das Konzept der Internal Surface Reversed Phase
(ISRP) 19
2.3.4.1. Die Internal Surface Reversed Phase nach Pinkerton 21
2.3.4.2. Die Internal Surface Reversed Phase nach Haginaka 25
2.3.4.3. Die Internal Surface Reversed Phase nach Kimata 28
3. Anwendungsprobleme der Restricted Access Phasen 29
4. Lipasen und Esterasen 31
4.1. Definition und Eigenschaften 31
4.2. Die Schweinepancreaslipase [EC 3.1.1.3] 32
4.3. Die üpase von Candida Cylindracea [EC 3.1.1.3] 33
4.4. Die Schweineleberesterase [EC 3.1.1.1] 33
5. Darstellung der Alkyl-Diol Phasen 35
5.1. Zur chemischen Modifikation
eingesetzteTrägermaterialien 35
5.2. Synthese 37
5.2.1. Chemische Modifizierung mit Alkylliganden 39
5.2.2. Enzymatische Hydrolyse der Fettsäureester 42
5.2.2.1. Vorversuche zur enzymatischen Hydrolyse 42
5.2.2.2. Enzymatische Hydrolyse mit nicht immobilisierten
Enzymen 44
5.2.2.3. Enzymatische Hydrolyse mit immobilisierten Enzymen 45
5.3. 13C-CP-MAS-Spektren der Alkyl-Diol Phasen 46
6. Charakterisierung der Alkyl-Diol Phasen 50
6.1. Porengröße der Alkyl-Diol Phasen 51
6.2. Proteineliminationsverhalten der Alkyl-Diol Phasen 53
6.3. Hydrolysestabilität der Alkyl-Diol Trägermaterialien 56
6.3. Bestimmung der Restaktivität von Silanolgruppen 59
6.4. lonenpaarchromatographie mit den ÄIkyl-Diol Phasen 62
7. Vergleich der Alkyl-Diol -Trägermaterialien mit anderen Restricted
Access Phasen 65
8. Anwendungen der Alkyl-Diol -Trägermaterialien im Rahmen der
systemintemen Probenaufbereitung 73
8.1. Analysensystem 73
8.1.1. Apparativer Aufbau 73
8.1.2. Analysenprogramm 75
8.2. Analysenzyklus 75
8.2.1. Sytemintegrierte Probenaufbereitung 75
8.2.2. Transfer 75
8.2.3. Analytische Trennung 76
8.2.4. Rekonditionierung 76
8.3. Nachweis von Theobromin, Theophyllin und Coffein aus
Plasma 77
8.4. Nachweis der Antiepileptika Phenobarbital,
Carbamazepin und Phenytoin aus Plasma 80
8.5. Nachweis von 8-Methoxypsoralen aus Plasma 84
8.6. Nachweis von Cyclosporin A aus hämolysiertem
Vollblut 88
9. Experimenteller Teil 91
9.1. Eingesetzte Geräte und Chemikalien 91
9.2. Darstellung der Alkyr-modifizierten Kieselgele 92
9.3. Enzymatische Hydrolyse 92
9.3.1. Herstellung einer Enzymlösung ausgehend von
lyophyllisierten Enzymen 92
9.3.2. Enzymkatalysierter Abbau mit nicht immobilisierten
Enzymen 92
9.3.3. Enzymkatalysierter Abbau mit immobilisierten Enzymen 93
9.4. Quantifizierung der enzymatischen Hydrolyse 93
9.4.1. Aufarbeitung eines Reaktionsansatzes mit nicht
immobilisierten Enzymen 93
9.4.2. Aufarbeitung eines Reaktionsansatzes mit immobilisierten
Enzymen 94
9.5. Immobilisierung von Carboxylesterhydrolasen an
Agarose-Beads 94
10. Zusammenfassung 95
11. Anhang 97
12. Literaturverzeichnis 100
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