4种葡萄卷叶伴随病毒多重RT-PCR检测

葡萄受卷叶伴随病毒侵染后,树势减弱,抗逆性变差,果穗着色不良,成熟期推迟,含糖量降低。目前已报道11种葡萄卷叶伴随病毒（Grapevine leafroll-associated virus,GLRaV）。为提高检测效率,降低检测费用,本文在研究单个卷叶伴随病毒RT-PCR检测技术基础上,对4种葡萄卷叶伴随病毒的多重RT-PCR模板浓度、引物浓度和退火温度进行优化,建立了同时检测葡萄卷叶伴随病毒-1（GLRaV-1）、葡萄卷叶伴随病毒-3（GLRaV-3）、葡萄卷叶伴随病毒-4（GLRaV-4）和葡萄卷叶伴随病毒-5（GLRaV-5）的多重RT-PCR技术体系。模板浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度、退火温度和循环次数对多重RT-PCR检测结果均有较大影响,而在一定范围内改变延伸时间和dNTP浓度对检测结果影响较小。对4种葡萄卷叶伴随病毒的PCR产物进行克隆和测序,扩增基因片段与GenBank中登录的基因序列同源性为95%～99%。所建立的多重RT-PCR技术检测田间样品效果良好。