嗜水气单胞菌黏附素基因克隆、序列分析及表达

嗜水气单胞菌黏附素基因克隆、序列分析及表达

利用PCR方法对江浙一带淡水鱼类暴发病病原致病性嗜水气单胞菌主要血清型O：9和O：97代表菌株TPS-30和BSK-10的黏附素基因（Al）进行扩增,并分析不同血清型和不同来源菌株Al的序列差异.结果表明：嗜水气单胞菌TPS-30株与BSK-10株相比较,Al序列在N端有个突变区,TPS-30株的Al基因突变区较BSK-10株短;通过pET28a（＋）载体构建TPS-30株黏附素基因的表达载体pET28a-AHal,转化大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达,通过SDS-PAGE分析,显示与预期大小约41ku相吻合的融合蛋白带,诱导6h后目的蛋白获得了高效表达,表达量占菌体总蛋白的44.0%...

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Veröffentlicht in:Zhejiang daxue xue bao. Journal of Zhejiang University. Agriculture and life sciences. Nong ye yu sheng ming ke xue ban 2010, Vol.36 (3), p.262-268
1. Verfasser: 潘晓艺 沈锦玉 郝贵杰 姚嘉赟 徐洋
Format: Artikel
Sprache:chi
Schlagworte:
保护性抗原
免疫原性
嗜水气单胞菌
血清型
黏附素基因
Online-Zugang:Volltext
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Beschreibung
Zusammenfassung:利用PCR方法对江浙一带淡水鱼类暴发病病原致病性嗜水气单胞菌主要血清型O：9和O：97代表菌株TPS-30和BSK-10的黏附素基因（Al）进行扩增,并分析不同血清型和不同来源菌株Al的序列差异.结果表明：嗜水气单胞菌TPS-30株与BSK-10株相比较,Al序列在N端有个突变区,TPS-30株的Al基因突变区较BSK-10株短;通过pET28a（＋）载体构建TPS-30株黏附素基因的表达载体pET28a-AHal,转化大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达,通过SDS-PAGE分析,显示与预期大小约41ku相吻合的融合蛋白带,诱导6h后目的蛋白获得了高效表达,表达量占菌体总蛋白的44.0%;通过免疫攻毒试验发现,免疫银鲫后血清效价在第5周达到峰值,重组表达的蛋白对同源菌株TPS-30和异源菌株BSK-10都具有较高的免疫保护率,分别达到94.7%和77.8%.这为基因工程亚单位疫苗的开发奠定了基础.
ISSN:1008-9209
DOI:10.3785/j.issn.1008-9209.2010.03.004