重组腺相关病毒介导NgRDN基因促进损伤后视神经轴突再生的实验研究

R3; 目的 探讨大鼠视网膜神经节细胞(RGC)内转染含NgRDN的重组腺相关病毒(AAV)后对视神经损伤后再生的影响,并观察其与晶状体损伤及巨噬细胞激活之间的关系.方法 将45只Wistar大鼠随机分为3组,A组为玻璃体注射携带绿色荧光蛋白(EGFP)的AAV-EGFP组,B组为玻璃体注射AAV-NgR-EGFP组,C组为玻璃体注射AAV-NgRDN-EGFP组,3种病毒滴度均为5×1011v.g/ml.每组又分3个亚组,各亚组5只大鼠,1组为玻璃体内注射rAAV组,2组为玻璃体内注射rAAV+晶状体损伤组,3组为玻璃体内注射rAAV+酵母多糖组.于玻璃体内注射rAAV后3周进行视神经夹伤,并于夹伤后4 d取右眼视网膜进行植片培养,通过βⅢ微管蛋白染色检测视网膜植块边缘的轴突生长情况;于夹伤后2周进行视神经生长相关蛋白(GAP)-43染色,观察视神经轴突再生情况.结果 视网膜植片βⅢ-微管蛋白染色表明,在无髓磷脂培养条件下,AAV-NgR-EGFP、AAV-NgRDN-EGFP对RGC的轴突再生无影响;而在含髓磷脂培养条件下,即模拟体内RGC的轴突生长环境,B组的轴突再生数量(13个±4个)还是长度(36 μm±4 μm)均低于A组(均P《0.01);C1组与A1组比较差异无统计学意义,C2和C3组轴突再生的数量及长度均分别高于A2和A3组,C2组(317个±45个、508 μm±44 μm)更高于C3组(238个±30个、365 μm±48 μm,均P《0.01);视神经GAP-43染色表明,B组视神经轴突再生明显低于A组,C1组轴突再生与A1组差异无统计学意义,而C2和C3组轴突再生显著高于A2和A3组.结论 玻璃体内转染AAV-NgRDN-EGFP同时使RGC处于激活状态可以促进视神经的轴突再生,NgRDN可以有效拮抗NgR的作用.