芸薹根肿菌活细胞PMAxx-qPCR快速定量检测方法的建立与应用

[目的]由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae)侵染引起的十字花科根肿病是一种世界性土传病害,病原菌长期存在于土壤中,对十字花科作物造成严重威胁.改良叠氮溴化丙锭(propidium monoazide xx,PMAxx)可选择性地穿透受损的死细胞膜,并抑制死细胞DNA的实时荧光定量PCR(qPCR)扩增.本文将PMAxx与qPCR技术相结合,建立一种快速检测芸薹根肿菌活菌的方法,为根肿病的早期诊断及制定科学的防控措施提供依据.[方法]配置浓度分别为0、5、10、20、40、60μmol·L-1的叠氮溴化丙锭PMA和改良叠氮溴化丙锭PMAxx,比较两种核酸染料对芸薹根肿...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Veröffentlicht in:中国农业科学 2022-05, Vol.55 (10), p.1938-1948
Hauptverfasser: 李晓菁, 张思雨, 刘迪, 袁晓伟, 李兴盛, 石延霞, 谢学文, 李磊, 范腾飞, 李宝聚, 柴阿丽
Format: Artikel
Sprache:chi
Online-Zugang:Volltext
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
container_end_page 1948
container_issue 10
container_start_page 1938
container_title 中国农业科学
container_volume 55
creator 李晓菁
张思雨
刘迪
袁晓伟
李兴盛
石延霞
谢学文
李磊
范腾飞
李宝聚
柴阿丽
description [目的]由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae)侵染引起的十字花科根肿病是一种世界性土传病害,病原菌长期存在于土壤中,对十字花科作物造成严重威胁.改良叠氮溴化丙锭(propidium monoazide xx,PMAxx)可选择性地穿透受损的死细胞膜,并抑制死细胞DNA的实时荧光定量PCR(qPCR)扩增.本文将PMAxx与qPCR技术相结合,建立一种快速检测芸薹根肿菌活菌的方法,为根肿病的早期诊断及制定科学的防控措施提供依据.[方法]配置浓度分别为0、5、10、20、40、60μmol·L-1的叠氮溴化丙锭PMA和改良叠氮溴化丙锭PMAxx,比较两种核酸染料对芸薹根肿菌死细胞DNA扩增的抑制效果,确定最佳核酸染料及工作浓度;设置光照时间分别为0、2、5、10、15和20 min,进行最佳光照时间的优化,建立芸薹根肿菌活细胞PMAxx-qPCR快速检测体系.设置芸薹根肿菌活孢子百分比为0、0.01%、0.1%、1%、10%、25%、50%、75%和100%的混合体系,验证PMAxx-qPCR体系的准确性,并应用于田间土壤样本中芸薹根肿菌活孢子的定量检测.[结果]PMAxx对芸薹根肿菌死细胞DNA的扩增抑制效果更好,当芸薹根肿菌浓度为1×108个孢子/mL,PMAxx预处理的最适终浓度为4μmol·L-1,最佳光照时间为10 min时,可有效地抑制死孢子DNA的扩增,仅以有活力孢子DNA为靶标选择性地扩增.利用PMAxx-qPCR技术检测已知不同活孢子比例的菌悬液样品,各样品实测孢子存活率和理论存活率之间呈正相关(R2=0.992).对田间采集的25份土壤样本,采用PMAxx-qPCR方法检测到11份样本中携带芸薹根肿菌,活细胞DNA浓度为32.35-6.97×103fg·g-1.[结论]建立了基于PMAxx-qPCR的芸薹根肿菌活细胞定量检测技术,该技术具有快速、准确、灵敏的特点,解决了 qPCR不能仅对活体病原菌进行准确鉴别和定量分析的问题,为制定有效的根肿病防控策略提供了依据.
doi_str_mv 10.3864/j.issn.0578-1752.2022.10.005
format Article
fullrecord <record><control><sourceid>wanfang_jour</sourceid><recordid>TN_cdi_wanfang_journals_zgnykx202210005</recordid><sourceformat>XML</sourceformat><sourcesystem>PC</sourcesystem><wanfj_id>zgnykx202210005</wanfj_id><sourcerecordid>zgnykx202210005</sourcerecordid><originalsourceid>FETCH-LOGICAL-s1025-61b95887149bf3893c6cc3257b916e44063636b3648bf13172c46de34ab1cc133</originalsourceid><addsrcrecordid>eNpjYFAxNNAztjAz0c_SyywuztMzMDW30DU0NzXSMzIwMtIDyhoYmLIwcMLFORh4i4szkwxMDY3NLEwsjTgZfF507XgxbeezBTtfNO1_0d_zbMvu57vbXjTPC_B1rKjQLQxwDnq6f_XLhvlP18162d7_bHHDs63dz4AaNk99Pqvl6e5dz1d3P9nR93TXlOdTVvAwsKYl5hSn8kJpboZQN9cQZw9dH393T2dHH91iQwMjU10zwyRLUwsLc0MTy6Q0YwtL42Sz5GRjI1PzJEtDs1QTEwMzYyBMMjYzsUhKMzQ2NDdKNjFLSTU2SUwyTE42NDbmZlCHmFuemJeWmJcen5VfWpQHtDG-Kj2vMrsC5HtDA6DfjQF4Qmih</addsrcrecordid><sourcetype>Aggregation Database</sourcetype><iscdi>true</iscdi><recordtype>article</recordtype></control><display><type>article</type><title>芸薹根肿菌活细胞PMAxx-qPCR快速定量检测方法的建立与应用</title><source>Elektronische Zeitschriftenbibliothek - Frei zugängliche E-Journals</source><creator>李晓菁 ; 张思雨 ; 刘迪 ; 袁晓伟 ; 李兴盛 ; 石延霞 ; 谢学文 ; 李磊 ; 范腾飞 ; 李宝聚 ; 柴阿丽</creator><creatorcontrib>李晓菁 ; 张思雨 ; 刘迪 ; 袁晓伟 ; 李兴盛 ; 石延霞 ; 谢学文 ; 李磊 ; 范腾飞 ; 李宝聚 ; 柴阿丽</creatorcontrib><description>[目的]由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae)侵染引起的十字花科根肿病是一种世界性土传病害,病原菌长期存在于土壤中,对十字花科作物造成严重威胁.改良叠氮溴化丙锭(propidium monoazide xx,PMAxx)可选择性地穿透受损的死细胞膜,并抑制死细胞DNA的实时荧光定量PCR(qPCR)扩增.本文将PMAxx与qPCR技术相结合,建立一种快速检测芸薹根肿菌活菌的方法,为根肿病的早期诊断及制定科学的防控措施提供依据.[方法]配置浓度分别为0、5、10、20、40、60μmol·L-1的叠氮溴化丙锭PMA和改良叠氮溴化丙锭PMAxx,比较两种核酸染料对芸薹根肿菌死细胞DNA扩增的抑制效果,确定最佳核酸染料及工作浓度;设置光照时间分别为0、2、5、10、15和20 min,进行最佳光照时间的优化,建立芸薹根肿菌活细胞PMAxx-qPCR快速检测体系.设置芸薹根肿菌活孢子百分比为0、0.01%、0.1%、1%、10%、25%、50%、75%和100%的混合体系,验证PMAxx-qPCR体系的准确性,并应用于田间土壤样本中芸薹根肿菌活孢子的定量检测.[结果]PMAxx对芸薹根肿菌死细胞DNA的扩增抑制效果更好,当芸薹根肿菌浓度为1×108个孢子/mL,PMAxx预处理的最适终浓度为4μmol·L-1,最佳光照时间为10 min时,可有效地抑制死孢子DNA的扩增,仅以有活力孢子DNA为靶标选择性地扩增.利用PMAxx-qPCR技术检测已知不同活孢子比例的菌悬液样品,各样品实测孢子存活率和理论存活率之间呈正相关(R2=0.992).对田间采集的25份土壤样本,采用PMAxx-qPCR方法检测到11份样本中携带芸薹根肿菌,活细胞DNA浓度为32.35-6.97×103fg·g-1.[结论]建立了基于PMAxx-qPCR的芸薹根肿菌活细胞定量检测技术,该技术具有快速、准确、灵敏的特点,解决了 qPCR不能仅对活体病原菌进行准确鉴别和定量分析的问题,为制定有效的根肿病防控策略提供了依据.</description><identifier>ISSN: 0578-1752</identifier><identifier>DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2022.10.005</identifier><language>chi</language><publisher>中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京100081%山东省华盛农业集团股份有限公司,山东青州262500</publisher><ispartof>中国农业科学, 2022-05, Vol.55 (10), p.1938-1948</ispartof><rights>Copyright © Wanfang Data Co. Ltd. All Rights Reserved.</rights><lds50>peer_reviewed</lds50><woscitedreferencessubscribed>false</woscitedreferencessubscribed></display><links><openurl>$$Topenurl_article</openurl><openurlfulltext>$$Topenurlfull_article</openurlfulltext><thumbnail>$$Uhttp://www.wanfangdata.com.cn/images/PeriodicalImages/zgnykx/zgnykx.jpg</thumbnail><link.rule.ids>314,776,780,27903,27904</link.rule.ids></links><search><creatorcontrib>李晓菁</creatorcontrib><creatorcontrib>张思雨</creatorcontrib><creatorcontrib>刘迪</creatorcontrib><creatorcontrib>袁晓伟</creatorcontrib><creatorcontrib>李兴盛</creatorcontrib><creatorcontrib>石延霞</creatorcontrib><creatorcontrib>谢学文</creatorcontrib><creatorcontrib>李磊</creatorcontrib><creatorcontrib>范腾飞</creatorcontrib><creatorcontrib>李宝聚</creatorcontrib><creatorcontrib>柴阿丽</creatorcontrib><title>芸薹根肿菌活细胞PMAxx-qPCR快速定量检测方法的建立与应用</title><title>中国农业科学</title><description>[目的]由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae)侵染引起的十字花科根肿病是一种世界性土传病害,病原菌长期存在于土壤中,对十字花科作物造成严重威胁.改良叠氮溴化丙锭(propidium monoazide xx,PMAxx)可选择性地穿透受损的死细胞膜,并抑制死细胞DNA的实时荧光定量PCR(qPCR)扩增.本文将PMAxx与qPCR技术相结合,建立一种快速检测芸薹根肿菌活菌的方法,为根肿病的早期诊断及制定科学的防控措施提供依据.[方法]配置浓度分别为0、5、10、20、40、60μmol·L-1的叠氮溴化丙锭PMA和改良叠氮溴化丙锭PMAxx,比较两种核酸染料对芸薹根肿菌死细胞DNA扩增的抑制效果,确定最佳核酸染料及工作浓度;设置光照时间分别为0、2、5、10、15和20 min,进行最佳光照时间的优化,建立芸薹根肿菌活细胞PMAxx-qPCR快速检测体系.设置芸薹根肿菌活孢子百分比为0、0.01%、0.1%、1%、10%、25%、50%、75%和100%的混合体系,验证PMAxx-qPCR体系的准确性,并应用于田间土壤样本中芸薹根肿菌活孢子的定量检测.[结果]PMAxx对芸薹根肿菌死细胞DNA的扩增抑制效果更好,当芸薹根肿菌浓度为1×108个孢子/mL,PMAxx预处理的最适终浓度为4μmol·L-1,最佳光照时间为10 min时,可有效地抑制死孢子DNA的扩增,仅以有活力孢子DNA为靶标选择性地扩增.利用PMAxx-qPCR技术检测已知不同活孢子比例的菌悬液样品,各样品实测孢子存活率和理论存活率之间呈正相关(R2=0.992).对田间采集的25份土壤样本,采用PMAxx-qPCR方法检测到11份样本中携带芸薹根肿菌,活细胞DNA浓度为32.35-6.97×103fg·g-1.[结论]建立了基于PMAxx-qPCR的芸薹根肿菌活细胞定量检测技术,该技术具有快速、准确、灵敏的特点,解决了 qPCR不能仅对活体病原菌进行准确鉴别和定量分析的问题,为制定有效的根肿病防控策略提供了依据.</description><issn>0578-1752</issn><fulltext>true</fulltext><rsrctype>article</rsrctype><creationdate>2022</creationdate><recordtype>article</recordtype><recordid>eNpjYFAxNNAztjAz0c_SyywuztMzMDW30DU0NzXSMzIwMtIDyhoYmLIwcMLFORh4i4szkwxMDY3NLEwsjTgZfF507XgxbeezBTtfNO1_0d_zbMvu57vbXjTPC_B1rKjQLQxwDnq6f_XLhvlP18162d7_bHHDs63dz4AaNk99Pqvl6e5dz1d3P9nR93TXlOdTVvAwsKYl5hSn8kJpboZQN9cQZw9dH393T2dHH91iQwMjU10zwyRLUwsLc0MTy6Q0YwtL42Sz5GRjI1PzJEtDs1QTEwMzYyBMMjYzsUhKMzQ2NDdKNjFLSTU2SUwyTE42NDbmZlCHmFuemJeWmJcen5VfWpQHtDG-Kj2vMrsC5HtDA6DfjQF4Qmih</recordid><startdate>20220516</startdate><enddate>20220516</enddate><creator>李晓菁</creator><creator>张思雨</creator><creator>刘迪</creator><creator>袁晓伟</creator><creator>李兴盛</creator><creator>石延霞</creator><creator>谢学文</creator><creator>李磊</creator><creator>范腾飞</creator><creator>李宝聚</creator><creator>柴阿丽</creator><general>中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京100081%山东省华盛农业集团股份有限公司,山东青州262500</general><scope>2B.</scope><scope>4A8</scope><scope>92I</scope><scope>93N</scope><scope>PSX</scope><scope>TCJ</scope></search><sort><creationdate>20220516</creationdate><title>芸薹根肿菌活细胞PMAxx-qPCR快速定量检测方法的建立与应用</title><author>李晓菁 ; 张思雨 ; 刘迪 ; 袁晓伟 ; 李兴盛 ; 石延霞 ; 谢学文 ; 李磊 ; 范腾飞 ; 李宝聚 ; 柴阿丽</author></sort><facets><frbrtype>5</frbrtype><frbrgroupid>cdi_FETCH-LOGICAL-s1025-61b95887149bf3893c6cc3257b916e44063636b3648bf13172c46de34ab1cc133</frbrgroupid><rsrctype>articles</rsrctype><prefilter>articles</prefilter><language>chi</language><creationdate>2022</creationdate><toplevel>peer_reviewed</toplevel><toplevel>online_resources</toplevel><creatorcontrib>李晓菁</creatorcontrib><creatorcontrib>张思雨</creatorcontrib><creatorcontrib>刘迪</creatorcontrib><creatorcontrib>袁晓伟</creatorcontrib><creatorcontrib>李兴盛</creatorcontrib><creatorcontrib>石延霞</creatorcontrib><creatorcontrib>谢学文</creatorcontrib><creatorcontrib>李磊</creatorcontrib><creatorcontrib>范腾飞</creatorcontrib><creatorcontrib>李宝聚</creatorcontrib><creatorcontrib>柴阿丽</creatorcontrib><collection>Wanfang Data Journals - Hong Kong</collection><collection>WANFANG Data Centre</collection><collection>Wanfang Data Journals</collection><collection>万方数据期刊 - 香港版</collection><collection>China Online Journals (COJ)</collection><collection>China Online Journals (COJ)</collection><jtitle>中国农业科学</jtitle></facets><delivery><delcategory>Remote Search Resource</delcategory><fulltext>fulltext</fulltext></delivery><addata><au>李晓菁</au><au>张思雨</au><au>刘迪</au><au>袁晓伟</au><au>李兴盛</au><au>石延霞</au><au>谢学文</au><au>李磊</au><au>范腾飞</au><au>李宝聚</au><au>柴阿丽</au><format>journal</format><genre>article</genre><ristype>JOUR</ristype><atitle>芸薹根肿菌活细胞PMAxx-qPCR快速定量检测方法的建立与应用</atitle><jtitle>中国农业科学</jtitle><date>2022-05-16</date><risdate>2022</risdate><volume>55</volume><issue>10</issue><spage>1938</spage><epage>1948</epage><pages>1938-1948</pages><issn>0578-1752</issn><abstract>[目的]由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae)侵染引起的十字花科根肿病是一种世界性土传病害,病原菌长期存在于土壤中,对十字花科作物造成严重威胁.改良叠氮溴化丙锭(propidium monoazide xx,PMAxx)可选择性地穿透受损的死细胞膜,并抑制死细胞DNA的实时荧光定量PCR(qPCR)扩增.本文将PMAxx与qPCR技术相结合,建立一种快速检测芸薹根肿菌活菌的方法,为根肿病的早期诊断及制定科学的防控措施提供依据.[方法]配置浓度分别为0、5、10、20、40、60μmol·L-1的叠氮溴化丙锭PMA和改良叠氮溴化丙锭PMAxx,比较两种核酸染料对芸薹根肿菌死细胞DNA扩增的抑制效果,确定最佳核酸染料及工作浓度;设置光照时间分别为0、2、5、10、15和20 min,进行最佳光照时间的优化,建立芸薹根肿菌活细胞PMAxx-qPCR快速检测体系.设置芸薹根肿菌活孢子百分比为0、0.01%、0.1%、1%、10%、25%、50%、75%和100%的混合体系,验证PMAxx-qPCR体系的准确性,并应用于田间土壤样本中芸薹根肿菌活孢子的定量检测.[结果]PMAxx对芸薹根肿菌死细胞DNA的扩增抑制效果更好,当芸薹根肿菌浓度为1×108个孢子/mL,PMAxx预处理的最适终浓度为4μmol·L-1,最佳光照时间为10 min时,可有效地抑制死孢子DNA的扩增,仅以有活力孢子DNA为靶标选择性地扩增.利用PMAxx-qPCR技术检测已知不同活孢子比例的菌悬液样品,各样品实测孢子存活率和理论存活率之间呈正相关(R2=0.992).对田间采集的25份土壤样本,采用PMAxx-qPCR方法检测到11份样本中携带芸薹根肿菌,活细胞DNA浓度为32.35-6.97×103fg·g-1.[结论]建立了基于PMAxx-qPCR的芸薹根肿菌活细胞定量检测技术,该技术具有快速、准确、灵敏的特点,解决了 qPCR不能仅对活体病原菌进行准确鉴别和定量分析的问题,为制定有效的根肿病防控策略提供了依据.</abstract><pub>中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京100081%山东省华盛农业集团股份有限公司,山东青州262500</pub><doi>10.3864/j.issn.0578-1752.2022.10.005</doi><tpages>11</tpages></addata></record>
fulltext fulltext
identifier ISSN: 0578-1752
ispartof 中国农业科学, 2022-05, Vol.55 (10), p.1938-1948
issn 0578-1752
language chi
recordid cdi_wanfang_journals_zgnykx202210005
source Elektronische Zeitschriftenbibliothek - Frei zugängliche E-Journals
title 芸薹根肿菌活细胞PMAxx-qPCR快速定量检测方法的建立与应用
url https://sfx.bib-bvb.de/sfx_tum?ctx_ver=Z39.88-2004&ctx_enc=info:ofi/enc:UTF-8&ctx_tim=2025-01-27T04%3A13%3A02IST&url_ver=Z39.88-2004&url_ctx_fmt=infofi/fmt:kev:mtx:ctx&rfr_id=info:sid/primo.exlibrisgroup.com:primo3-Article-wanfang_jour&rft_val_fmt=info:ofi/fmt:kev:mtx:journal&rft.genre=article&rft.atitle=%E8%8A%B8%E8%96%B9%E6%A0%B9%E8%82%BF%E8%8F%8C%E6%B4%BB%E7%BB%86%E8%83%9EPMAxx-qPCR%E5%BF%AB%E9%80%9F%E5%AE%9A%E9%87%8F%E6%A3%80%E6%B5%8B%E6%96%B9%E6%B3%95%E7%9A%84%E5%BB%BA%E7%AB%8B%E4%B8%8E%E5%BA%94%E7%94%A8&rft.jtitle=%E4%B8%AD%E5%9B%BD%E5%86%9C%E4%B8%9A%E7%A7%91%E5%AD%A6&rft.au=%E6%9D%8E%E6%99%93%E8%8F%81&rft.date=2022-05-16&rft.volume=55&rft.issue=10&rft.spage=1938&rft.epage=1948&rft.pages=1938-1948&rft.issn=0578-1752&rft_id=info:doi/10.3864/j.issn.0578-1752.2022.10.005&rft_dat=%3Cwanfang_jour%3Ezgnykx202210005%3C/wanfang_jour%3E%3Curl%3E%3C/url%3E&disable_directlink=true&sfx.directlink=off&sfx.report_link=0&rft_id=info:oai/&rft_id=info:pmid/&rft_wanfj_id=zgnykx202210005&rfr_iscdi=true