抗黄矮病小麦-中间偃麦草易位系基因组可转化人工染色体文库的构建及初步筛选

Q75; 利用抗黄矮病小麦-中间偃麦草易位系HW642的细胞核DNA构建了一个可转化人工染色体(transformation-competent artificial chromosome,TAC)文库,文库由2.3×106克隆构成,重组率为90.48%,平均插入片段大小为22kb左右,约覆盖普通小麦单倍体基因组2.5倍,在该文库中分离得到单拷贝DNA序列的几率约是95.77%.文库保存在24块96孔板中,每个孔中约含有1000个不同的重组克隆,可以采用Pooled PCR的方法对文库进行筛选.用来源于小麦的简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)引物wms37扩增中间偃麦草、抗病易位系及感病材料,得到一条与抗性共分离的特异条带,约450bp.将此特异标记条带转化为SCAR(sequence characterized amplified region)标记,用于筛选HW642基因组TAC文库,得到12个阳性克隆.对阳性克隆进行了PCR-Southern验证,以中间偃麦草基因组总DNA为探针与限制酶HindⅢ消化后的阳性克隆杂交,其中10个阳性克隆分别有1～6条杂交带,结果表明,这10个阳性克隆可作为抗黄矮病相关基因筛选的候选克隆.