快速提取肉类基因组DNA的裂解液的研究
目的 配制一种快速提取肉类DNA且满足重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)要求的裂解液.方法 分别配制3种裂解液:NaOH裂解液、Chelex裂解液与PBS裂解液,取200μL裂解液与20 mg肉类样品进行混合,振荡5 s,取上清液稀释10倍直接作为扩增模板.结果 3种裂解液中NaOH裂解液提取DNA在稀释与未稀释条件下均有较好的扩增,Chelex裂解液提取DNA在稀释与未稀释下均无扩增,PBS裂解液提取DNA在稀释作用下有较好的扩增,在未稀释作用下无扩增.裂解液提取法和试剂盒方法提取的纯度、产物的大小几乎一致,所扩增的为同一...
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| Veröffentlicht in: | 食品安全质量检测学报 2018, Vol.9 (17), p.4755-4758 |
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| Hauptverfasser: | , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | chi |
| Online-Zugang: | Volltext |
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| container_title | 食品安全质量检测学报 |
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| creator | 李婷婷 张桂兰 王之莹 陈爱亮 |
| description | 目的 配制一种快速提取肉类DNA且满足重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)要求的裂解液.方法 分别配制3种裂解液:NaOH裂解液、Chelex裂解液与PBS裂解液,取200μL裂解液与20 mg肉类样品进行混合,振荡5 s,取上清液稀释10倍直接作为扩增模板.结果 3种裂解液中NaOH裂解液提取DNA在稀释与未稀释条件下均有较好的扩增,Chelex裂解液提取DNA在稀释与未稀释下均无扩增,PBS裂解液提取DNA在稀释作用下有较好的扩增,在未稀释作用下无扩增.裂解液提取法和试剂盒方法提取的纯度、产物的大小几乎一致,所扩增的为同一产物,裂解液所需成本与试剂盒方法相比较低.结论 NaOH裂解液可以在5 min内提取肉类中的DNA,浓度与纯度均较高,所需时间短,成本低,且满足分子检测要求. |
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