Keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞系的构建
目的 利用CRISPR/Cas9技术构建一种keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞(hESCs)系,为研究表皮基底角质形成细胞异常的皮肤病提供一种细胞模型.方法 构建针对目的基因keratin 5的sgRNA质粒及打靶Donor质粒,利用CRISPR/Cas9技术完成对keratin 5的定向切割,将IRES-eGFP敲入至keratin 5终止密码子上游,诱导hESCs分化为表达绿色荧光蛋白(GFP)的基底层角质形成细胞.结果 PCR及Sanger测序结果表明IRES-eGFP成功整合至hESCs细胞系的keratin 5终止密码子上游,分化培养后观察细胞形态与角质形成细胞...
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Veröffentlicht in: | 皮肤性病诊疗学杂志 2022, Vol.29 (4), p.299-304 |
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Online-Zugang: | Volltext |
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creator | 郑雯 钟亚丹 王炫 刘慧婷 杨斌 刘军 |
description | 目的 利用CRISPR/Cas9技术构建一种keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞(hESCs)系,为研究表皮基底角质形成细胞异常的皮肤病提供一种细胞模型.方法 构建针对目的基因keratin 5的sgRNA质粒及打靶Donor质粒,利用CRISPR/Cas9技术完成对keratin 5的定向切割,将IRES-eGFP敲入至keratin 5终止密码子上游,诱导hESCs分化为表达绿色荧光蛋白(GFP)的基底层角质形成细胞.结果 PCR及Sanger测序结果表明IRES-eGFP成功整合至hESCs细胞系的keratin 5终止密码子上游,分化培养后观察细胞形态与角质形成细胞系HaCat形态一致.免疫荧光染色验证hESCs分化获得的ES-KC细胞系稳定表达GFP与keratin 5.结论 成功制备了keratin 5-IRES-eGFP敲入的hESCs细胞系,并诱导hESCs成功分化出带有绿色荧光蛋白标记的基底层角质形成细胞. |
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