柑橘转基因成分多重PCR检测体系的建立

S; [目的]建立柑橘转基因成分的多重PCR检测体系。[方法]根据GenBank中pBl 121质粒序列和柑橘（Citrus．）Actin基因序列，分别设计CaMV35S启动子、NOS启动子、NOS终止子特异引物和Actin基因的特异引物，建立能同时检测出4种序列的多重PCR检测体系，同时通过正交试验确定该体系的最佳引物浓度和比例及PCR反应体系中各因素的浓度及反应程序，并对该方法的灵敏度进行验证。[结果]试验得到的最佳MPCR反应体系为：10X buffer2．5μl，25mmol／LMgCl2 2．0μl；dNTP Mixture（2．5mmol／Leach）2．0μl，10μmol／L的Actin基因、35S启动子、NOS启动子、NOS终止子引物分别加入1．0、1．0、1．5、0．5μl，模板DNA0．1μg，砌DNA聚合酶1．25u，加ddH2O至25μl。PCR反应程序为：94℃预变性5min；94℃30s，64．1℃45S，72℃50s，31个循环；72℃10min。试验中，经正交优化后的4重PCR反应灵敏度达0．1％。【结论】该研究建立的MPCR检测体系，理论上已能满足柑橘或其深加工产品的转基因成分检测。