Isolamento e cultivo de protoplastos de porta-enxertos de citros

Realizou-se o isolamento e cultivo de protolastos de porta-enxertos de citros das variedades limoeiro Cravo e tangerina Cleópatra. Utilizou-se solução enzimática para a digestão da parede celular de células em suspensão (7 a 10 subcultivos em meio de cultura MT) e procedeu-se a purificação criteriosa. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em meio de cultivo KM8p e na molaridade de 0.6 M, sob condições de escuro a 28 ± 1°C, após ajuste para a densidade de 2 x 10s ppts/mL A redução da pressão osmótica do meio de cultivo foi realizada a cada 10 dias na seguinte proporção de meio de cultura KM8p 0.6 M e KM8 (2:1, 1:1, 1:2, 0:3). Com relação aos resultados, obteve-se em média o isolamento de 0.7 x 10(6) ppts / ml de suspensões celulares de tangerina Cleópatra e 0.5 x 1O6 ppts / ml de suspensões de limoeiro Cravo, com uma porcentagem de viabilidade de 86 a 92% para a variedade Cleópatra e de 73 a 80% para o limoeiro Cravo. As divisões celulares começaram a ocorrer por volta do 8° dia após o plaqueamento, sendo obtida uma eficiência inicial de plaqueamento de 9% para a variedade Cleópatra e de 5% para o limoeiro Cravo. Aos 50 dias de cultivo, as colônias foram transferidas para meio semi-sólido MT, onde apresentaram ritmo acelerado de crescimento formando calos.