Molecular Characterization and Expression Analysis of the Sterol-carrier Protein-2 Fragment in Anopheles sacharovi Generations

Amaç: Bu çalışmada, Anopheles sacharoviá.e sterol taşıyıcı protein-2 (SCP-2) geninin ilk kez moleküler karakterizasyonunun yapılması ve bu proteini kodlayan genin An. sacharovi gelişim dönemleri ve dişi nesillerin tükürük bezi, orta baǧırsak ve yaǧ dokusu gibi farklı dokularında ekspresyon düzeylerinin karşılaştırılması amaçlanmıştır. Yöntemler: Sultan Sazlıǧı yöresinden toplanan ergin dişi A??, sacharovi ve insektaryumda elde edilen gelişim dönemleri çalışma materyalini oluşturmuştur. Morfolojik ve moleküler tür identifikasyonu yapılan An. sacharovi nesilleri ve ergin dişi dokularından total RNA ekstraksiyonunu takiben cDNA izolasyonu gerçekleştirilmiştir. cDNA kalıplarında SCP-2 geninin 216 bp fragmenti optimize edilmiş primerlerle amplifiye edilmiş ve amplikonlar sekanslanmıştır. Sekanslar in-silico analizlerle işlenerek genetik karakterizasyonlan saǧlanmıştır. Bulgular: Sekans analizine alman toplam 14 izolata ait SCP-2 nükleotid sekanslarının 12 sinin %100 benzer olduǧu, birbirine homolog olan diǧer iki izolata ait SCP-2 sekanslannm ise 183. bazda tek nükleotid deǧişimi gösterdiǧi belirlenmiştir. SCP-2 gen bölgesinin 216 bp fragmen tinin 72 amino asit zincirini kodladıǧı tespit edilmiştir. Filogenetik analiz sonucu SCP-2 gen sekanslarının sivrisinek türü ve soyu bazında monofiletik olarak kümelendiǧi, An. sacharovi izolatlarmm Anopheles kümesi içerisinde An. stephensi ve An. funestusTa birlikte alt küme oluşturduǧu görülmüştür. qPCR ekspresyon analizleri sonucunda SCP-2,nin en yüksek ergin erkeklerde ifade olduǧu ve bunu sırasıyla ergin dişi, L4, L3, L2, L1 ve pupa dönemlerinin izlediǧi belirlenmiştir. Ergin dişi dokularında ise SCP-2,nin en yüksek, fatbody'de ifade olduǧu bunu sırasıyla midgut ve tükrük bezinin izlediǧi belirlenmiştir. Sonuç: Bu çalışmada, vektör potansiyeli yüksek olan An. sacharovi için aşı adayı veya hedef ilaç bölgelerinden önemli birisi olan SCP-2 ilk kez karakterize edilmiş ve sivrisineǧin gelişim evreleri ve dokularındaki ekspresyonel farklılıklar ortaya konulmuştur.