Anaplasma Phagocytophilum’un tayinine yönelik elektrokimyasal DNA sensörü geliştirilmesi

Bu çalışma, oldukça geniş bir konakçı gurubunda enfeksiyona yol açan bir patojen olan Anaplasma Phagocytophilum dizi seçimli DNA hibridizasyonunun voltametrik yöntemle tayin edildiği tek kullanımlık elektrokimyasal DNA biyosensörü geliştirilmesine yöneliktir. Herhangi bir etiketlemenin yapılmadığı bu elektrokimyasal çalışmanın esasını DNA hibridizasyonu sonrasında Guanin bazının yükseltgenme sinyalinin ölçülmesi ile bir dubleks oluşumunun izlenmesi oluşturur. Söz konusu biyosensör tasarımı inozinmodifiye (guanin içermeyen) probun, kalem grafit elektrota (PGE) immobilize edilmesi ve diferansiyel puls voltametrisi (DPV) ile guanin yükseltgenme sinyalinin ölçülerek, dubleks oluşumu tayinini içerir. Bu çalışmanın ilk aşamasında, Anaplasma phagocytophilum temsil eden prob dizisi, aktive edilmiş kalem grafit elektrot (PGE) yüzeyine yaş adsorbsiyon yöntemi ile immobilize edilmiş ve daha sonra prob ve hedefi arasındaki hibridizasyonun varlığı 1000 mV’da gözlenen guanin yükseltgenme sinyali ile tespit edilmiştir. Yapılan optimizasyon çalışmasında prob derişimi 25 μg/mL, prob immobilize süresi 6 dakika; hibridizasyon için hedef derişimi 40 μg/mL ve hibridizasyon süresinin 10 dakika olduğu gözlenmiştir. Geliştirilen elektrokimyasal biyosensörün spesifikliği, baz sırasından bir bazın yeri (MM) ve tüm bazların yerleri farklı (NC) olan hedef diziler kullanılarak, test edilmiştir. Ferri/Ferro siyanür redoks sistemi altında elektrokimyasal empedans yöntemi kullanılarak yapılan empedimetrik ölçümler ile DNA hibridizasyonunun gerçekleştirildiği ayrıca teyit edilmiştir. Tayin sınırını (DL) belirlemek için hedef derişimi 0,78 μM ile 3,90 μM arasında değişen hedef diziler kullanılmış ve tayin sınırı 0,244 μM olarak bulunmuştur.