新型大腸桿菌／乳酸桿菌穿梭載體之建構與應用
乳酸菌為不產生孢子之革蘭氏陽性球菌、球桿菌或桿菌，能利用碳水化合物進行發酵，產生以乳酸為主之代謝產物。有關乳酸菌之應用十分多元化，例如作為發酵乳製品之菌酛或益生菌。某些乳酸菌如乳酸鏈球菌 (Lactococcus lactis) 亦被開發成為用於生產重組蛋白質之表現宿主。然乳酸菌基因表現系統之建立仍遭遇多項瓶頸，例如無適當載體可供使用與無合適之基因轉形方法。本研究之主要目的在於利用胚芽乳酸桿菌 (Lactobacillus plantarum) ATIT-023無性狀質體pLP-8之複製區域建構一種新型大腸桿菌/乳酸桿菌穿梭載體，以作為乳酸菌基因工程之操作工具。新型穿梭載體pBRLP-8係結合...
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| Veröffentlicht in: | 臺灣農業化學與食品科學 2016-10, Vol.54 (5), p.236-246 |
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| Hauptverfasser: | , , , , |
| Format: | Artikel |
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| Online-Zugang: | Volltext |
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| container_title | 臺灣農業化學與食品科學 |
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| creator | 陳正文(Zeng-Weng Chen) 黃文正(Wen-Cheng Huang) 宣詩玲(Shih-Ling Hsuan) 林俊宏(Jiunn-Horng Lin) 王志鵬(Jyh-Perng Wang) |
| description | 乳酸菌為不產生孢子之革蘭氏陽性球菌、球桿菌或桿菌，能利用碳水化合物進行發酵，產生以乳酸為主之代謝產物。有關乳酸菌之應用十分多元化，例如作為發酵乳製品之菌酛或益生菌。某些乳酸菌如乳酸鏈球菌 (Lactococcus lactis) 亦被開發成為用於生產重組蛋白質之表現宿主。然乳酸菌基因表現系統之建立仍遭遇多項瓶頸，例如無適當載體可供使用與無合適之基因轉形方法。本研究之主要目的在於利用胚芽乳酸桿菌 (Lactobacillus plantarum) ATIT-023無性狀質體pLP-8之複製區域建構一種新型大腸桿菌/乳酸桿菌穿梭載體，以作為乳酸菌基因工程之操作工具。新型穿梭載體pBRLP-8係結合大腸桿菌載體pBR322與L. plantarum ATIT-023質體pLP-8之複製區域建構而成。利用電轉形法可將pBRLP-8轉形至L. plantarum ATIT-018與鼠李糖乳酸桿菌(Lactobacillus rhamnosus GG, LGG) 中。即時定量聚合酶連鎖反應結果顯示，pBRLP-8於L. plantarum ATIT-018與LGG之複製數分別為37與27。進一步將乳酸鏈球菌之P23表現訊號與增強型綠螢光蛋白質基因嵌入pBRLP-8，建構表現載體pBRLP-8-P23-GFPT。將pBRLP-8-P23-GFPT轉形至L. plantarum ATIT-018與LGG後發現乳酸桿菌轉形株可表現增強型綠螢光蛋白質。以上結果說明，利用pBRLP-8所衍生之表現載體搭配L. plantarum ATIT-018或LGG可建立新型基因表現系統。 |
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