Molecular characterization of virulence genes cctA, nanA, and fliC in Clostridium chauvoei from Rio Grande do Sul and Sao Paulo State, Brazil/Caracterizacao molecular dos genes de virulencia cctA, nanA e fliC em Clostridium chauvoei isolados no Rio Grande do Sul e Sao Paulo, Brasil

Clostridium chauvoei toxin A (CctA), neuraminidase (NanA), andflagellin (FliC) proteins contribute to the pathogenicity of Clostridium chauvoei, the causative agent of blackleg in cattle. The aim of this study was to analyze the genetic variability of cctA, nanA, and fliC genes in C. chauvoei isolates from the Rio Grande do Sul and Sao Paulo state-Brazil, during different sampling periods. The presence of these genes was verified through PCR amplification and partial gene sequencing of 17 strains. Alignment of PCR amplicons combined with bioinformatics analysis was used in an attempt to study the variability across C. chauvoei solates. The similarity among the partial sequences of cctA and nanA genes was 100%. The sequencing of fliC revealed three different paralog alleles offlagellin, and two strains were seen to be polymorphic, with amino acid alterations in the predicted protein. Overall, this study indicates that strains of C. chauvoei isolated in Brazil are highly conserved with respect to the virulence factors evaluated. Key words: blackleg, Clostridium chauvoei toxin A, neuraminidase, flagellin. Toxina A de Clostridium chauvoei (CctA), neuraminidase (NanA) e flagelina (FliC) sao proteinas que contribuem para a patogenicidade de Clostridium chauvoei, o agente causador do carbunculo sintomatico em bovinos. O objetivo deste estudo foi analisar a variabilidade genetica dos genes cctA, nanA, e fliC em C. chauvoei isolados em diferentes periodos no Rio Grande do Sul e Sao Paulo. A presenca destes genes foi verificada pela amplificacao dos produtos da PCR e sequenciamento parcial dos genes de 17 cepas. Os alinhamentos da amplificacao dos produtos da PCR combinados com a analise de bioinformatica foram utilizados na tentativa de avaliar a variabilidade dos genes entre os isolados de C. chauvoei. A similaridade do sequenciamento parcial dos genes cctA e nanA foi 100%. O sequenciamento do fliC revelou tres alelos paralogos diferentes de flagelina e duas cepas mostraram polimorfismos, causando alteracoes na sequencia de aminoacidos. As cepas de C. chauvoei isoladas no Brasil mostraram-se altamente conservadas em relacao aos fatores de virulencia avaliados neste estudo. Palavras-chave: carbunculo sintomatico, Clostridium chauvoei toxina A, neuraminidase, flagelina.