Estudio de la tirosina 98 de la recombinasa G35P del bacteriofago SPP1

La replicación del bacteriófago SPP1 se inicia por replicación tipo theta (9), y tras una o más rondas de replicación, se produce un cambio dependiente de recombinación a replicación tipo sigma (g) sintetizándose ADN concatemérico que es esencial para el correcto empaquetamiento del ADN en la procápside. SPP1 transcribe un número de genes esenciales implicados en el cambio de replicación y generación del concatémero. Uno de estos genes, localizado en el promotor PE3, codifica la proteína G35P. La proteína G35P es una recombinasa de la familia Redl3 capaz de unirse a ADN de cadena sencilla y de cadena doble, además de catalizar la reacción de anillamiento de cadenas entre un ADN de cadena sencilla circular y una cola homologa 3' de un ADN de cadena doble. Aun no se ha podido obtener la estructura por difracción de rayos X de G35P, por lo que se desconocen los dominios encargados de su actividad. Este trabajo tiene como objetivo localizar residuos de G35P que pudieran estar involucrados en las distintas actividades descritas para la proteína. Mediante mutagénesis dirigida, se ha construido el mutante G35P-Y98A y se ha desarrollado un protocolo de purificación. Ensayos de unión de la proteína G35P-Y98A a ADN muestran que la mutación en el residuo Y98 afecta a la capacidad de unión a ADN de cadena sencilla. Palabras clave: bacteriófago SPP1, recombinasas de la familia Red, replicación de ADN, recombinación homóloga.