METHOD OF PRODUCING DOXORUBICIN

The present invention provides novel methods for producing doxorubicin using daunomycin as a substrate. One method employs a genetically engineered host microorganism which is transformed with a vector, preferably a plasmid, which contains the doxA gene. Preferably, the doxA gene, also referred to herein as "doxA", is cloned into a plasmid which is then introduced into the host microorganism, preferably a bacterial host, more preferably Streptomyces, to provide a transformed host microorganism. The doxA gene, when present on a plasmid, confers on the transformed host the ability to convert daunomycin and 13-dihydrodaunomycin, to doxorubicin. The doxA gene encodes a P450-like enzyme which catalyzes the hydroxylation of daunomycin and 13-dihydrodaunomycin at C-14 to form doxorubicin; such enzyme is designated "daunomycin C-14 hydroxylase". Thus, the expression of doxA in the transformed host using a plasmid which contains doxA enables the transformed host to convert daunomycin to doxorubicin. The doxorubicin is then extracted from host microorganism cultures. La présente invention concerne de nouveaux procédés permettant de produire de la doxorubicine en utilisant la daunomycine comme substrat. Dans un procédé, on utilise un micro-organisme hôte produit par génie génétique qui est transformé par un vecteur, de préférence un plasmide, contenant le gène doxA. De préférence, le gène doxA, désigné également ci-après par "doxA", est cloné dans un plasmide qui est ensuite introduit dans le micro-organisme hôte, de préférence une bactérie hôte et de préférence Streptomyces, afin d'obtenir un micro-organisme hôte transformé. Le gène doxA, lorsqu'il est présent sur un plasmide, confère à l'hôte transformé la capacité de transformer la daunomycine et la 13-dihydrodaunomycine en doxorubicine. Le gène doxA code une enzyme de type P450 qui catalyse l'hydroxylation de la daunomycine et de la 13-dihydrodaunomycine en C-14 pour former la doxorubicine; cette enzyme est appelée "hydroxylase de daunomycine C-14". L'expression du doxA dans l'hôte transformé au moyen d'un plasmide contenant le doxA rend ainsi l'hôte transformé capable de transformer la daunomycine en doxorubicine. On extrait ensuite la doxorubicine des cultures de micro-organismes hôtes.