A PROCESS FOR GENERATING GLYCOENGINEERED AAV VECTORS FOR HEPATIC AND OCULAR GENE THERAPY AND PRODUCT THEREOF

The present invention provides for a process for synthesising glycoengineered adeno-associated virus vectors. The process includes generating AAV vectors in presence of a group of glycosylation modulators. The process also includes predicting antigenicity of AAV2 capsid protein of the AAV vectors using B-cell and T-cell linear epitope mapping tools in order to refine epitopes of the AAV capsid protein. The process further includes targeting the refined epitopes for site-directed mutagenesis, while using a set of primers, by introducing or abolishing N- and O- glycosylation motifs in the AAV capsid to obtain the plurality of glycoengineered adeno-associated virus (AAV) vectors. The site-directed mutagenesis of target amino acids of the AAV capsid comprises NQ, QN, SA, AT, E/K/Q/RT and Y/S/TN. The glycoengineered adeno-associated virus vectors possess higher gene expression, with respect to wild type, after hepatic and ocular gene transfer. La présente invention porte sur un procédé de synthèse de vecteurs à virus adéno-associé glycomodifiés. Le procédé consiste à : générer des vecteurs AAV en présence d'un groupe de modulateurs de glycosylation; prédire l'antigénicité de la protéine capsidique AAV2 des vecteurs AAV à l'aide d'outils de cartographie d'épitopes linéaires de lymphocytes B et de lymphocytes T afin d'affiner des épitopes de la protéine capsidique d'AAV; cibler les épitopes affinés pour une mutagenèse dirigée sur site, au moyen d'un ensemble d'amorces, en introduisant ou en supprimant des motifs de glycosylation N- et O- dans la capside d'AAV afin d'obtenir la pluralité des vecteurs à virus adéno-associés glycomodifiés (AAV). La mutagenèse dirigée sur site d'acides aminés cibles de la capside d'AAV comprend NQ, QN, SA, AT, E/K/Q/RT et Y/S/TN. Les vecteurs à virus adéno-associé glycomodifiés présentent une expression génique supérieure, par rapport au type sauvage, après le transfert d'un gène hépatique et oculaire.