A COMBINATION OF SPLIT ORTHOGONAL PROTEASES WITH DIMERIZATION DOMAINS THAT ALLOW FOR ASSEMBLY

Invention refers to combination of split orthogonal proteases that recognize and cleave target sequence of at least 6 amino acids. Parts of split orthogonal proteases are fused to dimerization domains that allow formation of the whole protease from two split protease parts. At least two orthogonal proteases are designed as split fragments fused to dimerization domains where dimerization can be induced with either light, chemicals or other input signal. Proteases cleave one or more target proteins that include cleavage site for one or more orthogonal proteases and act as a signal transducers, reporters or therapeutic proteins. With appropriately selected target proteins, logical circuits mediated by proteases can be prepared. The invention also relates to cells that contain expressed split proteases to transmit the signal. L'invention concerne une combinaison de protéases orthogonales dédoublées qui reconnaissent et clivent une séquence cible d'au moins 6 acides aminés. Des parties de protéases orthogonales dédoublées sont fusionnées à des domaines de dimérisation qui permettent la formation de la protéase entière à partir de deux parties de protéases dédoublées. Au moins deux protéases orthogonales sont conçues sous la forme de fragments dédoublés fusionnés à des domaines de dimérisation dans lesquels la dimérisation peut être induite à l'aide de la lumière, de produits chimiques ou d'un autre signal d'entrée. Les protéases clivent une ou plusieurs protéines cibles qui comprennent un site de clivage destiné à une ou plusieurs protéases orthogonales et agissent en tant que transducteurs de signal, rapporteurs ou protéines thérapeutiques. Des circuits logiques médiés par des protéases peuvent être préparés avec des protéines cibles sélectionnées de manière appropriée. L'invention concerne également des cellules qui contiennent des protéases dédoublées exprimées pour transmettre le signal.