METHOD FOR IMPROVING PROTEIN FUNCTIONALITY USING VORTEXING FLUID SHEAR FORCES
A method of improving protein functionality includes obtaining a protein such as protein contained within exclusion bodies contained within bacteria or yeast used for the recombinant expression of the protein. The exclusion bodies are solubilized using a chaotropic agent such as guanidine or urea. T...
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| Format: | Patent |
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| creator | KUDLACEK, STEPHAN TIMOTHY ORMONDE, CALLUM RASTON, COLIN L WEISS, GREGORY A YUAN, TOM Z |
| description | A method of improving protein functionality includes obtaining a protein such as protein contained within exclusion bodies contained within bacteria or yeast used for the recombinant expression of the protein. The exclusion bodies are solubilized using a chaotropic agent such as guanidine or urea. The protein is then subject to denaturation conditions and optionally purified. A liquid containing the denatured protein is loaded into a vessel that is angled relative to horizontal. The vessel is then rotated in the angled configuration at a rate within that is less than 10,000 RPM for period of time. Refolded protein is formed by the high shear conditions formed in the thin film of fluid formed in the inner surface of the rotating vessel. Refolding can be performed in a batch mode or a continuous mode. The process may be scaled up for industrial applications by using multiple vessels.
La présente invention concerne un procédé d'amélioration de la fonctionnalité d'une protéine comprenant l'obtention d'une protéine telle qu'une protéine contenue dans des corps d'exclusion contenus dans une bactérie ou une levure utilisée pour l'expression par recombinaison de la protéine. Les corps d'exclusion sont solubilisés au moyen d'un agent chaotrope tel que la guanidine ou l'urée. La protéine est ensuite soumise à des conditions de dénaturation et éventuellement purifiée. Un liquide contenant la protéine dénaturée est déposé dans un récipient qui est incliné par rapport à l'horizontale. Le récipient est ensuite fait tourner dans la configuration inclinée à une vitesse qui est inférieure à 10 000 tours par minute pendant une période. La protéine repliée est formée par les conditions de cisaillement élevé formées dans le film mince de fluide formé dans la surface interne du récipient en rotation. Le repliement peut être réalisé selon un mode discontinu ou un mode continu. Le procédé peut être étendu à une échelle supérieure pour des applications industrielles par l'utilisation de plusieurs récipients. |
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La présente invention concerne un procédé d'amélioration de la fonctionnalité d'une protéine comprenant l'obtention d'une protéine telle qu'une protéine contenue dans des corps d'exclusion contenus dans une bactérie ou une levure utilisée pour l'expression par recombinaison de la protéine. Les corps d'exclusion sont solubilisés au moyen d'un agent chaotrope tel que la guanidine ou l'urée. La protéine est ensuite soumise à des conditions de dénaturation et éventuellement purifiée. Un liquide contenant la protéine dénaturée est déposé dans un récipient qui est incliné par rapport à l'horizontale. Le récipient est ensuite fait tourner dans la configuration inclinée à une vitesse qui est inférieure à 10 000 tours par minute pendant une période. La protéine repliée est formée par les conditions de cisaillement élevé formées dans le film mince de fluide formé dans la surface interne du récipient en rotation. Le repliement peut être réalisé selon un mode discontinu ou un mode continu. Le procédé peut être étendu à une échelle supérieure pour des applications industrielles par l'utilisation de plusieurs récipients.</description><language>eng ; fre</language><subject>BEER ; BIOCHEMISTRY ; CHEMISTRY ; COMPOSITIONS THEREOF ; CULTURE MEDIA ; ENZYMES ; ENZYMOLOGY ; FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE ; METALLURGY ; MICROBIOLOGY ; MICROORGANISMS OR ENZYMES ; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING ; ORGANIC CHEMISTRY ; PEPTIDES ; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS ; SPIRITS ; VINEGAR ; WINE</subject><creationdate>2015</creationdate><oa>free_for_read</oa><woscitedreferencessubscribed>false</woscitedreferencessubscribed></display><links><openurl>$$Topenurl_article</openurl><openurlfulltext>$$Topenurlfull_article</openurlfulltext><thumbnail>$$Tsyndetics_thumb_exl</thumbnail><linktohtml>$$Uhttps://worldwide.espacenet.com/publicationDetails/biblio?FT=D&date=20150312&DB=EPODOC&CC=WO&NR=2015034915A1$$EHTML$$P50$$Gepo$$Hfree_for_read</linktohtml><link.rule.ids>230,308,780,885,25564,76547</link.rule.ids><linktorsrc>$$Uhttps://worldwide.espacenet.com/publicationDetails/biblio?FT=D&date=20150312&DB=EPODOC&CC=WO&NR=2015034915A1$$EView_record_in_European_Patent_Office$$FView_record_in_$$GEuropean_Patent_Office$$Hfree_for_read</linktorsrc></links><search><creatorcontrib>KUDLACEK, STEPHAN TIMOTHY</creatorcontrib><creatorcontrib>ORMONDE, CALLUM</creatorcontrib><creatorcontrib>RASTON, COLIN L</creatorcontrib><creatorcontrib>WEISS, GREGORY A</creatorcontrib><creatorcontrib>YUAN, TOM Z</creatorcontrib><title>METHOD FOR IMPROVING PROTEIN FUNCTIONALITY USING VORTEXING FLUID SHEAR FORCES</title><description>A method of improving protein functionality includes obtaining a protein such as protein contained within exclusion bodies contained within bacteria or yeast used for the recombinant expression of the protein. The exclusion bodies are solubilized using a chaotropic agent such as guanidine or urea. The protein is then subject to denaturation conditions and optionally purified. A liquid containing the denatured protein is loaded into a vessel that is angled relative to horizontal. The vessel is then rotated in the angled configuration at a rate within that is less than 10,000 RPM for period of time. Refolded protein is formed by the high shear conditions formed in the thin film of fluid formed in the inner surface of the rotating vessel. Refolding can be performed in a batch mode or a continuous mode. The process may be scaled up for industrial applications by using multiple vessels.
La présente invention concerne un procédé d'amélioration de la fonctionnalité d'une protéine comprenant l'obtention d'une protéine telle qu'une protéine contenue dans des corps d'exclusion contenus dans une bactérie ou une levure utilisée pour l'expression par recombinaison de la protéine. Les corps d'exclusion sont solubilisés au moyen d'un agent chaotrope tel que la guanidine ou l'urée. La protéine est ensuite soumise à des conditions de dénaturation et éventuellement purifiée. Un liquide contenant la protéine dénaturée est déposé dans un récipient qui est incliné par rapport à l'horizontale. Le récipient est ensuite fait tourner dans la configuration inclinée à une vitesse qui est inférieure à 10 000 tours par minute pendant une période. La protéine repliée est formée par les conditions de cisaillement élevé formées dans le film mince de fluide formé dans la surface interne du récipient en rotation. Le repliement peut être réalisé selon un mode discontinu ou un mode continu. 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The exclusion bodies are solubilized using a chaotropic agent such as guanidine or urea. The protein is then subject to denaturation conditions and optionally purified. A liquid containing the denatured protein is loaded into a vessel that is angled relative to horizontal. The vessel is then rotated in the angled configuration at a rate within that is less than 10,000 RPM for period of time. Refolded protein is formed by the high shear conditions formed in the thin film of fluid formed in the inner surface of the rotating vessel. Refolding can be performed in a batch mode or a continuous mode. The process may be scaled up for industrial applications by using multiple vessels.
La présente invention concerne un procédé d'amélioration de la fonctionnalité d'une protéine comprenant l'obtention d'une protéine telle qu'une protéine contenue dans des corps d'exclusion contenus dans une bactérie ou une levure utilisée pour l'expression par recombinaison de la protéine. Les corps d'exclusion sont solubilisés au moyen d'un agent chaotrope tel que la guanidine ou l'urée. La protéine est ensuite soumise à des conditions de dénaturation et éventuellement purifiée. Un liquide contenant la protéine dénaturée est déposé dans un récipient qui est incliné par rapport à l'horizontale. Le récipient est ensuite fait tourner dans la configuration inclinée à une vitesse qui est inférieure à 10 000 tours par minute pendant une période. La protéine repliée est formée par les conditions de cisaillement élevé formées dans le film mince de fluide formé dans la surface interne du récipient en rotation. Le repliement peut être réalisé selon un mode discontinu ou un mode continu. Le procédé peut être étendu à une échelle supérieure pour des applications industrielles par l'utilisation de plusieurs récipients.</abstract><oa>free_for_read</oa></addata></record> |
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