HIGHLY SENSITIVE METHOD FOR DETECTION OF A TARGET NUCLEIC ACID IN A SAMPLE

The present invention relates, in a first aspect, to a highly sensitive method to detect a target nucleic acid in a sample, comprising a step a) of amplification of the target nucleic acid sequence in presence of at least of one primer and one probe, wherein the primer melting temperature (Tm) is at least 5°C above the melting temperature (Tm) of the probe and said amplification is carried out at a temperature above the Tm of said probe in order to allow hybridization of the primer to the target nucleic acid sequence essentially in the absence of hybridization of said probe; and a step b) of amplification and detection by RT-PCR of the signal produced by hybridization of said probe to the target nucleic acid sequence. La présente invention concerne dans un premier aspect une méthode de détection de forte sensibilité d'un acide nucléique cible dans un échantillon, comprenant une étape a) d'amplification de la séquence de l'acide nucléique cible en présence d'au moins une amorce et une sonde, la température de fusion (Tf) de l'amorce étant supérieure d'au moins 5 °C à la température de fusion (Tf) de la sonde, et ladite amplification étant mise en oeuvre à une température supérieure à la Tf de ladite sonde pour permettre l'hybridation de l'amorce à la séquence de l'acide nucléique cible essentiellement en l'absence d'hybridation de ladite sonde; et une étape b) d'amplification et de détection par PCR en temps réel du signal produit par hybridation de ladite sonde à ladite séquence de l'acide nucléique cible.