VIABILITY ANALYSIS OF PROTOZOA USING POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR)

The present invention relates to a method for detecting viable protozoa cells in a sample fluid comprising the steps of: (i) contacting a sample fluid with a phenanthridium compound capable of preferentially penetrating dead or membrane-compromised cells over viable and/or substantially intact cells to intercalate with at least one nucleic acid molecule to; (ii) exposing the sample fluid to a light source to substantially covalently bind nucleic acid molecules of dead or membrane-compromised cells to the phenanthridium compound to form a reacted sample; (iii) separating the cells from any excess phenanthridium compound; (iv) lysing the viable and/or substantially intact cells to release nucleic acid molecules into solution; and (v) performing a PCR on the nucleic acid solution with PCR primers specific to the protozoa, wherein detection of amplification indicates the presence of viable and/or substantially intact protozoa cells. La présente invention a pour objet un procédé de détection de cellules de protozoaires viables dans un fluide échantillon comprenant les étapes consistant : (i) à mettre en contact un fluide échantillon avec un composé phénanthridium capable de pénétrer de manière préférentielle dans des cellules mortes ou à membrane fragilisée par rapport aux cellules viables et/ou sensiblement intactes pour s'y intercaler avec au moins une molécule d'acide nucléique ; (ii) à exposer le fluide échantillon à une source de lumière pour lier de manière sensiblement covalente des molécules d'acide nucléique de cellules mortes ou à membrane fragilisée au composé phénanthridium pour former un échantillon ayant réagi ; (iii) à séparer les cellules de tout composé phénanthridium en excès ; (iv) à lyser les cellules viables et/ou sensiblement intactes pour libérer des molécules d'acide nucléique en solution ; et (v) à réaliser une ACP sur la solution d'acide nucléique à l'aide d'amorces d'ACP spécifiques aux protozoaires, la détection d'une amplification indiquant la présence de cellules de protozoaires viables et/ou sensiblement intactes.