DETECTION OF PROTEIN EXPRESSION IN VIVO USING FLUORESCENT PUROMYCIN CONJUGATES

Disclosed is a class of reagents for examining protein expression in vivo that does not require transfection, radiolabeling, or the prior choice of a candidate gene. Further, a series of puromycin conjugates was constructed bearing various labeling moieties. These conjugates were readily incorporated into expressed protein products in cell lysates in vitro and efficiently cross cell membranes to function in protein synthesis in vivo as indicated by flow cytometry, selective enrichment studies, and western analysis. The present invention demonstrates that labeled-puromycin conjugates offer a general means to examine protein expression in vivo La présente invention concerne une classe de réactifs permettant d'examiner l'expression de protéines in vivo qui ne nécessite pas de transfection, de radio-étiquetage où le choix préalable d'un gène candidat. Par ailleurs, une série de conjugués de puromycine ont été construits porteurs de diverses fractions d'étiquetage. Ces conjugués ont été immédiatement incorporés dans des protéines exprimées dans des lysats cellulaires et dans des membranes cellulaires croisées efficacement de façon fonctionner en une synthèse de protéines in vivo comme indiqué par la cytométrie de flux, les études d'enrichissement sélectif et l'analyse par transfert Western. La présente invention démontre que des conjugués de puromycine étiquetés offrent un moyen général d'examiner l'expression de protéines in vivo.