SIMULTANEOUS DETECTION OF HBV, HCV AND HIV IN PLASMA SAMPLES USING A MULTIPLEX CAPTURE ASSAY

The present invention is directed to a capture assay to simultaneously screen for HBV, HCV and HIV nucleic acids in samples such as plasma. The nucleic acids including both viral DNA and RNA are purified from the plasma samples in a single extraction procedure. In one embodiment, a mixture of degenerate biotin-labelled PCR primers specific for the HBV, HCV, HIV-1 type M and HIV-1 type O are used to amplify any of these viruses which may be present in plasma. Amplified products are captured by hybridization to immobilized capture sequence, and thereafter detected. An internal control vector containing a synthetic fragment flanked by sequences corresponding to the HBV primers was designed to monitor sample recovery during extraction, amplification and detection. All major subtypes of HBV, HCV and HIV-1 including HIV-1 type O have been confirmed and detected by the assay. La présente invention concerne une analyse par capture permettant de cribler simultanément les acides nucléiques de VHB, VHC et VIH dans des échantillons de plasma, par exemple. Les acides nucléiques contenant de l'ADN et de l'ARN viraux sont purifiés à partir des échantillons de plasma au cours d'une opération d'extraction unique. Dans un mode de réalisation, un mélange d'amorces PCR étiquetées par de la biotine dégénérée et spécifiques à VHB, VHC, VIH-1 de type M et VIH-1 de type O est utilisé pour amplifier n'importe lequel de ces virus susceptible de se trouver dans le plasma. Les produits amplifiés sont capturés par hybridation avec une séquence de capture immobilisée, puis détectés. Un vecteur de contrôle interne contenant un fragment synthétique flanqué de séquences correspondant aux amorces VHB permet de surveiller la récupération de l'échantillon au cours de l'extraction, de l'amplification et de la détection. Tous les sous-types principaux de VHB, VHC et VIH-1, y compris VIH-1 de type O, ont été confirmés et détectés au moyen de cette analyse.