METHOD AND KIT FOR MEASURING TOTAL PYRIDINIUM CROSSLINKS

Disclosed is a method for forming peptide-free pyridinium crosslinks. In the method, a sample containing one or more pyridinium crosslink-containing collagen peptides is mixed with: i) at least one acid reagent having a pKa less than or equal to 2 and ii) at least one reducing agent, which preferably contains a free thiol, such that the acid reagent and reducing agent may be separate compounds or may be combined in a single compound, and the mixture is heated for a time sufficient to convert substantially all of the pyridinium cross links to their peptide-free forms. The method provides enhanced cross link yields and sensitivity relative to prior methods, particularly for blood samples. The invention also includes a method for measuring pyridinoline and/or deoxypyridinoline crosslinks in a sample, methods for assessing a level of collagen degradation in a subject, and kits and reagents therefor. La présente invention concerne un procédé de formation de réticulations pyridinium exemptes de peptide. Dans ce procédé, un échantillon contenant un ou plusieurs peptides collagène à réticulations pyridinium est mélangé avec: a) au moins un réactif acide présentant un pKa inférieur ou égal à 2 et b) au moins un agent réducteur, contenant de préférence un thiol libre, de sorte que le réactif acide et l'agent réducteur puissent être des composés séparés ou combinés en un seul composé, ce mélange étant chauffé pendant un temps suffisamment long pour transformer sensiblement la totalité des réticulations pyridinium en leur forme exempte de peptide. Ce procédé permet d'obtenir des rendements de réticulation accrus et une sensibilité améliorée par rapport aux procédés connus, en particulier pour les échantillons sanguins. En outre, cette invention comprend un procédé de mesure des réticulations pyridinoline et/ou desoxypyridinoline dans un échantillon, des procédés de détermination du taux de dégradation de collagène chez un sujet, ainsi que des kits et des réactifs correspondants.