METHOD OF PREPARATION OF ERYTHROCYTE IMMUNOGLOBULIN TULAREMIA DIAGNOSTICUM

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to biotechnology and concerns a method for preparing an erythrocyte immunoglobulin tularemia diagnosticum. The essence of the method is that a 20% suspension of formalinized erythrocytes is obtained for sensitization with tularemia immunoglobulins isolated from immune serum fractionated with caprylic acid. Next, 25 ml of citrate buffer pH-5.0 are added, and incubation for 1 hour at a temperature of 45ºC is carried out. In parallel to 50 ml of immunoglobulins with a protein concentration of 400 mcg/ml on 0.9% sodium chloride solution, 1.5 ml of a conjugating agent - secondary sodium alkyl sulfate at a concentration of 2% is added, and incubation for 1 h at a temperature of 45ºC is carried out. Erythrocytes are mixed on a citrate buffer with conjugated immunoglobulins and incubated for 12 hours at a temperature of 45ºC. The process of double washing from non-bound immunoglobulins is carried out by centrifugation with a 0.1 M solution of phosphate-salt buffer. The process is completed by adding 0.9% sodium chloride solution to a volume of 100 ml and formalin preservative to 1.5%.EFFECT: use of the method makes it possible to obtain a diagnostic tool for detecting the causative agent of tularemia with high sensitivity and stability.1 cl, 1 tbl, 3 ex Изобретение относится к биотехнологии и касается способа приготовления эритроцитарного диагностикума иммуноглобулинового туляремийного. Сущность способа заключается в том, что получают 20% взвеси формалинизированных эритроцитов для сенсибилизации туляремийными иммуноглобулинами, выделенными из иммунной сыворотки, фракционированной каприловой кислотой. Далее добавляют 25 мл цитратного буфера рН-5,0, инкубирование 1 ч при температуре 45°С. Параллельно к 50 мл иммуноглобулинов с концентрацией белка 400 мкг/мл на 0,9% растворе хлорида натрия, вносят 1,5 мл конъюгирующего агента - вторичного алкилсульфат натрия в концентрации 2%, инкубируют 1 ч при температуре 45°С. Проводят смешивание эритроцитов на цитратном буфере с конъюгированными иммуноглобулинами и инкубирование 12 ч при температуре 45°С. Процесс двойной отмывки от не связавшихся иммуноглобулинов проводят центрифугированием с 0,1 М раствором фосфатно-солевого буфера. Завершают процесс добавлением 0,9% раствора хлорида натрия до объема 100 мл и консерванта формалина до 1,5%. Использование способа позволяет получить диагностикум для обнаружения возбудителя туляремии с высокой чувствительностью и стабильностью. 1 таб