METHOD OF PRODUCING TRANSPLANT FOR TREATING LIMBAL INSUFFICIENCY

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention refers to biotechnology, namely to obtaining a transplant for treating limbal insufficiency. Method involves mechanical cleaning of allogenic sclera, its soaking in 6 % hydrogen peroxide solution and maintenance for 4 hours (destruction of tissue pigments, lipid structures and disinfection), then washed with sterile distilled water and frozen at a temperature of -20 °C for 2 hours (which enables to destroy cell membranes). Then defrostation is soaked in water solution of ammonium hydroxide 10 % for 2 hours at temperature of 40 °C (which promotes washing out of lipids, but does not cause collagen denaturation). Then one performs washing with sterile physiological solution, soaking in 6 % hydrogen peroxide solution and holding for 6 hours. Then one performs washing with sterile normal saline, dividing into fragments 2 mm wide and 4 mm long and soaked in physiologic saline for 20 minutes. Fragments are placed in culture plates with 10 ml of culture medium DMEM/F12 with addition of 15 % of embryonal serum and added with 1 ml of concentrated cell suspension MMSC and progenitor cells of epithelium of cornea (0.5-0.6 × 10cells/ml) and incubated for 5 days.EFFECT: disclosed is a method for producing a transplant for treating limbal insufficiency.1 cl, 1 tbl, 2 ex Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению трансплантата для лечения лимбальной недостаточности. Способ включает механическую очистку аллогенной склеры, ее замачивание в 6% растворе перекиси водорода и выдерживание 4 часа (достигается разрушение тканевых пигментов, липидных структур и обеззараживание), затем промывают стерильной дистиллированной водой и замораживают при температуре -20°C 2 часа (что позволяет разрушить клеточные мембраны). Затем после дефростации замачивают в водном растворе гидроксида аммония 10% на 2 часа при температуре 40°C (что способствует вымыванию липидов, но не вызывает денатурацию коллагена). Далее отмывают стерильным физиологическим раствором, замачивают в 6% растворе перекиси водорода и выдерживают 6 часов. Далее промывают стерильным физиологическим раствором, разделяют на фрагменты шириной 2 мм и длиной 4 мм и вымачивают в физиологическом растворе в течение 20 минут. Фрагменты помещают в культуральные планшеты с 10 мл питательной среды DMEM/F12 с добавлением 15% эмбриональной сыворотки и добавляют 1 мл концентрированной клеточной суспензии ММСК и прогениторных клеток эпителия роговицы (0,5-0,6×10клеток/мл) и инкубирую