METHOD FOR DETECTING AND GENOTYPING RNA OF PORCINE REPRODUCTIVE-RESPIRATORY SYNDROME VIRUS
FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to the field of biotechnology. Invention is a method for detecting and genotyping RNA of porcine reproductive and respiratory syndrome virus, involving RNA extraction from biological material of infected pigs by a sorption method, synthesis of cDNA o...
Gespeichert in:
| Hauptverfasser: | , , , , , , , , , , , , , , , , , |
|---|---|
| Format: | Patent |
| Sprache: | eng ; rus |
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Volltext bestellen |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| container_end_page | |
|---|---|
| container_issue | |
| container_start_page | |
| container_title | |
| container_volume | |
| creator | Dorozhkin Vasilij Ivanovich Donnik Irina Mikhajlovna Amerkhanov Kharon Adievich Drobin Yurij Dmitrievich Koshchaev Andrej Georgievich Dunin Ivan Mikhajlovich Lysenko Aleksandr Anatolievich Krivonos Roman Anatolevich Plemyashov Kirill Vladimirovich Kolomiets Sergej Nikolaevich Bannov Vasilij Aleksandrovich Shevkoplyas Vladimir Nikolaevich Kotelnikova Aleksandra Andreevna Bakharev Aleksej Aleksandrovich Krivonogova Anna Sergeevna Chernykh Oleg Yurevich Malyshev Denis Vladislavovich Dajbova Lyubov Anatolevna |
| description | FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to the field of biotechnology. Invention is a method for detecting and genotyping RNA of porcine reproductive and respiratory syndrome virus, involving RNA extraction from biological material of infected pigs by a sorption method, synthesis of cDNA on the RNA matrix by staging a single-step multiplex reverse transcription reaction and polymerase chain reaction with the addition of an internal control sample based on bacteriophage MS2 and a positive control sample, consisting of an internal control sample based on bacteriophage MS2, European and American genotypes of porcine reproductive-respiratory syndrome virus, conducting 40 amplification cycles with real-time detection using oligonucleotide primer reproductive-respiratory syndrome virus virus-specific viruses, fluorescent-labeled probes and control samples, measuring accumulation of a fluorescent signal through channels of corresponding fluorescent dyes and interpreting results based on presence or absence of intersection of the fluorescence curve with the threshold line, according to the invention for internal control sample suspension of bacteriophage MS2 with concentration of 5×10copies of nucleotide sequences per 1 mcl, and for a positive control sample, a mixture containing nucleic acid fragments of European and American genotypes of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and a native bacteriophage MS2 genome fragment taken in ratio of 1:1:1, wherein accumulation of fluorescent signal is measured in channels: FAM/Green for a specific signal of the European genotype of porcine reproductive and respiratory syndrome virus; JOE/Yellow for a specific signal of the American genotype of the same virus and Cy5/Red for the internal control signal if the fluorescent signal accumulation curves are up to 35 cycles, then the result of the reaction is considered positive, and if the curves do not cross the threshold line or cross it after 35 cycles, the reaction result is negative.EFFECT: invention provides reliable diagnosis of porcine reproductive and respiratory syndrome and detecting various serotypes of the virus.1 cl, 3 dwg, 4 tbl
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ выявления и генотипирования РНК вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, включающий выделение РНК из биологического материала инфицированных свиней сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтап |
| format | Patent |
| fullrecord | <record><control><sourceid>epo_EVB</sourceid><recordid>TN_cdi_epo_espacenet_RU2703394C1</recordid><sourceformat>XML</sourceformat><sourcesystem>PC</sourcesystem><sourcerecordid>RU2703394C1</sourcerecordid><originalsourceid>FETCH-epo_espacenet_RU2703394C13</originalsourceid><addsrcrecordid>eNqNykEKwjAQQNFsXIh6h7lAQY0gLkMyabNoJkzSQropReJKtFDvjwoewNXnw1uLocXUkAFLDAYT6uR8DcobqNFTyuG77BWQhUCsnUdgDEym-9AeK8YYHKtEnCFmb5hahN5xF7didZvuS9n9uhFgMemmKvNzLMs8XcujvEbujue9lJeTPsg_yBsqcTIc</addsrcrecordid><sourcetype>Open Access Repository</sourcetype><iscdi>true</iscdi><recordtype>patent</recordtype></control><display><type>patent</type><title>METHOD FOR DETECTING AND GENOTYPING RNA OF PORCINE REPRODUCTIVE-RESPIRATORY SYNDROME VIRUS</title><source>esp@cenet</source><creator>Dorozhkin Vasilij Ivanovich ; Donnik Irina Mikhajlovna ; Amerkhanov Kharon Adievich ; Drobin Yurij Dmitrievich ; Koshchaev Andrej Georgievich ; Dunin Ivan Mikhajlovich ; Lysenko Aleksandr Anatolievich ; Krivonos Roman Anatolevich ; Plemyashov Kirill Vladimirovich ; Kolomiets Sergej Nikolaevich ; Bannov Vasilij Aleksandrovich ; Shevkoplyas Vladimir Nikolaevich ; Kotelnikova Aleksandra Andreevna ; Bakharev Aleksej Aleksandrovich ; Krivonogova Anna Sergeevna ; Chernykh Oleg Yurevich ; Malyshev Denis Vladislavovich ; Dajbova Lyubov Anatolevna</creator><creatorcontrib>Dorozhkin Vasilij Ivanovich ; Donnik Irina Mikhajlovna ; Amerkhanov Kharon Adievich ; Drobin Yurij Dmitrievich ; Koshchaev Andrej Georgievich ; Dunin Ivan Mikhajlovich ; Lysenko Aleksandr Anatolievich ; Krivonos Roman Anatolevich ; Plemyashov Kirill Vladimirovich ; Kolomiets Sergej Nikolaevich ; Bannov Vasilij Aleksandrovich ; Shevkoplyas Vladimir Nikolaevich ; Kotelnikova Aleksandra Andreevna ; Bakharev Aleksej Aleksandrovich ; Krivonogova Anna Sergeevna ; Chernykh Oleg Yurevich ; Malyshev Denis Vladislavovich ; Dajbova Lyubov Anatolevna</creatorcontrib><description>FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to the field of biotechnology. Invention is a method for detecting and genotyping RNA of porcine reproductive and respiratory syndrome virus, involving RNA extraction from biological material of infected pigs by a sorption method, synthesis of cDNA on the RNA matrix by staging a single-step multiplex reverse transcription reaction and polymerase chain reaction with the addition of an internal control sample based on bacteriophage MS2 and a positive control sample, consisting of an internal control sample based on bacteriophage MS2, European and American genotypes of porcine reproductive-respiratory syndrome virus, conducting 40 amplification cycles with real-time detection using oligonucleotide primer reproductive-respiratory syndrome virus virus-specific viruses, fluorescent-labeled probes and control samples, measuring accumulation of a fluorescent signal through channels of corresponding fluorescent dyes and interpreting results based on presence or absence of intersection of the fluorescence curve with the threshold line, according to the invention for internal control sample suspension of bacteriophage MS2 with concentration of 5×10copies of nucleotide sequences per 1 mcl, and for a positive control sample, a mixture containing nucleic acid fragments of European and American genotypes of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and a native bacteriophage MS2 genome fragment taken in ratio of 1:1:1, wherein accumulation of fluorescent signal is measured in channels: FAM/Green for a specific signal of the European genotype of porcine reproductive and respiratory syndrome virus; JOE/Yellow for a specific signal of the American genotype of the same virus and Cy5/Red for the internal control signal if the fluorescent signal accumulation curves are up to 35 cycles, then the result of the reaction is considered positive, and if the curves do not cross the threshold line or cross it after 35 cycles, the reaction result is negative.EFFECT: invention provides reliable diagnosis of porcine reproductive and respiratory syndrome and detecting various serotypes of the virus.1 cl, 3 dwg, 4 tbl
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ выявления и генотипирования РНК вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, включающий выделение РНК из биологического материала инфицированных свиней сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с добавлением внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2 и положительного контрольного образца, состоящего из внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2, европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, проведение 40 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченных зондов и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×10копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь, содержащую фрагменты нуклеиновых кислот европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней и фрагмент генома нативного бактериофага MS2, взятых в соотношении 1:1:1, при этом накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: FAM/Green для специфического сигнала европейского генотипа вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней; JOE/Yellow для специфического сигнала американского генотипа этого же вируса и Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции отрицательный. Изобретение позволяет обеспечить достоверную диагностику репродуктивно-респираторного синдрома свиней и выявление различных серотипов вируса. 3 ил., 4 табл.</description><language>eng ; rus</language><subject>BEER ; BIOCHEMISTRY ; CHEMISTRY ; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR ; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES ; ENZYMOLOGY ; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS ; METALLURGY ; MICROBIOLOGY ; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING ; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS ; SPIRITS ; VINEGAR ; WINE</subject><creationdate>2019</creationdate><oa>free_for_read</oa><woscitedreferencessubscribed>false</woscitedreferencessubscribed></display><links><openurl>$$Topenurl_article</openurl><openurlfulltext>$$Topenurlfull_article</openurlfulltext><thumbnail>$$Tsyndetics_thumb_exl</thumbnail><linktohtml>$$Uhttps://worldwide.espacenet.com/publicationDetails/biblio?FT=D&date=20191016&DB=EPODOC&CC=RU&NR=2703394C1$$EHTML$$P50$$Gepo$$Hfree_for_read</linktohtml><link.rule.ids>230,308,776,881,25542,76516</link.rule.ids><linktorsrc>$$Uhttps://worldwide.espacenet.com/publicationDetails/biblio?FT=D&date=20191016&DB=EPODOC&CC=RU&NR=2703394C1$$EView_record_in_European_Patent_Office$$FView_record_in_$$GEuropean_Patent_Office$$Hfree_for_read</linktorsrc></links><search><creatorcontrib>Dorozhkin Vasilij Ivanovich</creatorcontrib><creatorcontrib>Donnik Irina Mikhajlovna</creatorcontrib><creatorcontrib>Amerkhanov Kharon Adievich</creatorcontrib><creatorcontrib>Drobin Yurij Dmitrievich</creatorcontrib><creatorcontrib>Koshchaev Andrej Georgievich</creatorcontrib><creatorcontrib>Dunin Ivan Mikhajlovich</creatorcontrib><creatorcontrib>Lysenko Aleksandr Anatolievich</creatorcontrib><creatorcontrib>Krivonos Roman Anatolevich</creatorcontrib><creatorcontrib>Plemyashov Kirill Vladimirovich</creatorcontrib><creatorcontrib>Kolomiets Sergej Nikolaevich</creatorcontrib><creatorcontrib>Bannov Vasilij Aleksandrovich</creatorcontrib><creatorcontrib>Shevkoplyas Vladimir Nikolaevich</creatorcontrib><creatorcontrib>Kotelnikova Aleksandra Andreevna</creatorcontrib><creatorcontrib>Bakharev Aleksej Aleksandrovich</creatorcontrib><creatorcontrib>Krivonogova Anna Sergeevna</creatorcontrib><creatorcontrib>Chernykh Oleg Yurevich</creatorcontrib><creatorcontrib>Malyshev Denis Vladislavovich</creatorcontrib><creatorcontrib>Dajbova Lyubov Anatolevna</creatorcontrib><title>METHOD FOR DETECTING AND GENOTYPING RNA OF PORCINE REPRODUCTIVE-RESPIRATORY SYNDROME VIRUS</title><description>FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to the field of biotechnology. Invention is a method for detecting and genotyping RNA of porcine reproductive and respiratory syndrome virus, involving RNA extraction from biological material of infected pigs by a sorption method, synthesis of cDNA on the RNA matrix by staging a single-step multiplex reverse transcription reaction and polymerase chain reaction with the addition of an internal control sample based on bacteriophage MS2 and a positive control sample, consisting of an internal control sample based on bacteriophage MS2, European and American genotypes of porcine reproductive-respiratory syndrome virus, conducting 40 amplification cycles with real-time detection using oligonucleotide primer reproductive-respiratory syndrome virus virus-specific viruses, fluorescent-labeled probes and control samples, measuring accumulation of a fluorescent signal through channels of corresponding fluorescent dyes and interpreting results based on presence or absence of intersection of the fluorescence curve with the threshold line, according to the invention for internal control sample suspension of bacteriophage MS2 with concentration of 5×10copies of nucleotide sequences per 1 mcl, and for a positive control sample, a mixture containing nucleic acid fragments of European and American genotypes of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and a native bacteriophage MS2 genome fragment taken in ratio of 1:1:1, wherein accumulation of fluorescent signal is measured in channels: FAM/Green for a specific signal of the European genotype of porcine reproductive and respiratory syndrome virus; JOE/Yellow for a specific signal of the American genotype of the same virus and Cy5/Red for the internal control signal if the fluorescent signal accumulation curves are up to 35 cycles, then the result of the reaction is considered positive, and if the curves do not cross the threshold line or cross it after 35 cycles, the reaction result is negative.EFFECT: invention provides reliable diagnosis of porcine reproductive and respiratory syndrome and detecting various serotypes of the virus.1 cl, 3 dwg, 4 tbl
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ выявления и генотипирования РНК вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, включающий выделение РНК из биологического материала инфицированных свиней сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с добавлением внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2 и положительного контрольного образца, состоящего из внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2, европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, проведение 40 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченных зондов и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×10копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь, содержащую фрагменты нуклеиновых кислот европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней и фрагмент генома нативного бактериофага MS2, взятых в соотношении 1:1:1, при этом накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: FAM/Green для специфического сигнала европейского генотипа вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней; JOE/Yellow для специфического сигнала американского генотипа этого же вируса и Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции отрицательный. Изобретение позволяет обеспечить достоверную диагностику репродуктивно-респираторного синдрома свиней и выявление различных серотипов вируса. 3 ил., 4 табл.</description><subject>BEER</subject><subject>BIOCHEMISTRY</subject><subject>CHEMISTRY</subject><subject>COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR</subject><subject>CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES</subject><subject>ENZYMOLOGY</subject><subject>MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS</subject><subject>METALLURGY</subject><subject>MICROBIOLOGY</subject><subject>MUTATION OR GENETIC ENGINEERING</subject><subject>PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS</subject><subject>SPIRITS</subject><subject>VINEGAR</subject><subject>WINE</subject><fulltext>true</fulltext><rsrctype>patent</rsrctype><creationdate>2019</creationdate><recordtype>patent</recordtype><sourceid>EVB</sourceid><recordid>eNqNykEKwjAQQNFsXIh6h7lAQY0gLkMyabNoJkzSQropReJKtFDvjwoewNXnw1uLocXUkAFLDAYT6uR8DcobqNFTyuG77BWQhUCsnUdgDEym-9AeK8YYHKtEnCFmb5hahN5xF7didZvuS9n9uhFgMemmKvNzLMs8XcujvEbujue9lJeTPsg_yBsqcTIc</recordid><startdate>20191016</startdate><enddate>20191016</enddate><creator>Dorozhkin Vasilij Ivanovich</creator><creator>Donnik Irina Mikhajlovna</creator><creator>Amerkhanov Kharon Adievich</creator><creator>Drobin Yurij Dmitrievich</creator><creator>Koshchaev Andrej Georgievich</creator><creator>Dunin Ivan Mikhajlovich</creator><creator>Lysenko Aleksandr Anatolievich</creator><creator>Krivonos Roman Anatolevich</creator><creator>Plemyashov Kirill Vladimirovich</creator><creator>Kolomiets Sergej Nikolaevich</creator><creator>Bannov Vasilij Aleksandrovich</creator><creator>Shevkoplyas Vladimir Nikolaevich</creator><creator>Kotelnikova Aleksandra Andreevna</creator><creator>Bakharev Aleksej Aleksandrovich</creator><creator>Krivonogova Anna Sergeevna</creator><creator>Chernykh Oleg Yurevich</creator><creator>Malyshev Denis Vladislavovich</creator><creator>Dajbova Lyubov Anatolevna</creator><scope>EVB</scope></search><sort><creationdate>20191016</creationdate><title>METHOD FOR DETECTING AND GENOTYPING RNA OF PORCINE REPRODUCTIVE-RESPIRATORY SYNDROME VIRUS</title><author>Dorozhkin Vasilij Ivanovich ; Donnik Irina Mikhajlovna ; Amerkhanov Kharon Adievich ; Drobin Yurij Dmitrievich ; Koshchaev Andrej Georgievich ; Dunin Ivan Mikhajlovich ; Lysenko Aleksandr Anatolievich ; Krivonos Roman Anatolevich ; Plemyashov Kirill Vladimirovich ; Kolomiets Sergej Nikolaevich ; Bannov Vasilij Aleksandrovich ; Shevkoplyas Vladimir Nikolaevich ; Kotelnikova Aleksandra Andreevna ; Bakharev Aleksej Aleksandrovich ; Krivonogova Anna Sergeevna ; Chernykh Oleg Yurevich ; Malyshev Denis Vladislavovich ; Dajbova Lyubov Anatolevna</author></sort><facets><frbrtype>5</frbrtype><frbrgroupid>cdi_FETCH-epo_espacenet_RU2703394C13</frbrgroupid><rsrctype>patents</rsrctype><prefilter>patents</prefilter><language>eng ; rus</language><creationdate>2019</creationdate><topic>BEER</topic><topic>BIOCHEMISTRY</topic><topic>CHEMISTRY</topic><topic>COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR</topic><topic>CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES</topic><topic>ENZYMOLOGY</topic><topic>MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS</topic><topic>METALLURGY</topic><topic>MICROBIOLOGY</topic><topic>MUTATION OR GENETIC ENGINEERING</topic><topic>PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS</topic><topic>SPIRITS</topic><topic>VINEGAR</topic><topic>WINE</topic><toplevel>online_resources</toplevel><creatorcontrib>Dorozhkin Vasilij Ivanovich</creatorcontrib><creatorcontrib>Donnik Irina Mikhajlovna</creatorcontrib><creatorcontrib>Amerkhanov Kharon Adievich</creatorcontrib><creatorcontrib>Drobin Yurij Dmitrievich</creatorcontrib><creatorcontrib>Koshchaev Andrej Georgievich</creatorcontrib><creatorcontrib>Dunin Ivan Mikhajlovich</creatorcontrib><creatorcontrib>Lysenko Aleksandr Anatolievich</creatorcontrib><creatorcontrib>Krivonos Roman Anatolevich</creatorcontrib><creatorcontrib>Plemyashov Kirill Vladimirovich</creatorcontrib><creatorcontrib>Kolomiets Sergej Nikolaevich</creatorcontrib><creatorcontrib>Bannov Vasilij Aleksandrovich</creatorcontrib><creatorcontrib>Shevkoplyas Vladimir Nikolaevich</creatorcontrib><creatorcontrib>Kotelnikova Aleksandra Andreevna</creatorcontrib><creatorcontrib>Bakharev Aleksej Aleksandrovich</creatorcontrib><creatorcontrib>Krivonogova Anna Sergeevna</creatorcontrib><creatorcontrib>Chernykh Oleg Yurevich</creatorcontrib><creatorcontrib>Malyshev Denis Vladislavovich</creatorcontrib><creatorcontrib>Dajbova Lyubov Anatolevna</creatorcontrib><collection>esp@cenet</collection></facets><delivery><delcategory>Remote Search Resource</delcategory><fulltext>fulltext_linktorsrc</fulltext></delivery><addata><au>Dorozhkin Vasilij Ivanovich</au><au>Donnik Irina Mikhajlovna</au><au>Amerkhanov Kharon Adievich</au><au>Drobin Yurij Dmitrievich</au><au>Koshchaev Andrej Georgievich</au><au>Dunin Ivan Mikhajlovich</au><au>Lysenko Aleksandr Anatolievich</au><au>Krivonos Roman Anatolevich</au><au>Plemyashov Kirill Vladimirovich</au><au>Kolomiets Sergej Nikolaevich</au><au>Bannov Vasilij Aleksandrovich</au><au>Shevkoplyas Vladimir Nikolaevich</au><au>Kotelnikova Aleksandra Andreevna</au><au>Bakharev Aleksej Aleksandrovich</au><au>Krivonogova Anna Sergeevna</au><au>Chernykh Oleg Yurevich</au><au>Malyshev Denis Vladislavovich</au><au>Dajbova Lyubov Anatolevna</au><format>patent</format><genre>patent</genre><ristype>GEN</ristype><title>METHOD FOR DETECTING AND GENOTYPING RNA OF PORCINE REPRODUCTIVE-RESPIRATORY SYNDROME VIRUS</title><date>2019-10-16</date><risdate>2019</risdate><abstract>FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to the field of biotechnology. Invention is a method for detecting and genotyping RNA of porcine reproductive and respiratory syndrome virus, involving RNA extraction from biological material of infected pigs by a sorption method, synthesis of cDNA on the RNA matrix by staging a single-step multiplex reverse transcription reaction and polymerase chain reaction with the addition of an internal control sample based on bacteriophage MS2 and a positive control sample, consisting of an internal control sample based on bacteriophage MS2, European and American genotypes of porcine reproductive-respiratory syndrome virus, conducting 40 amplification cycles with real-time detection using oligonucleotide primer reproductive-respiratory syndrome virus virus-specific viruses, fluorescent-labeled probes and control samples, measuring accumulation of a fluorescent signal through channels of corresponding fluorescent dyes and interpreting results based on presence or absence of intersection of the fluorescence curve with the threshold line, according to the invention for internal control sample suspension of bacteriophage MS2 with concentration of 5×10copies of nucleotide sequences per 1 mcl, and for a positive control sample, a mixture containing nucleic acid fragments of European and American genotypes of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and a native bacteriophage MS2 genome fragment taken in ratio of 1:1:1, wherein accumulation of fluorescent signal is measured in channels: FAM/Green for a specific signal of the European genotype of porcine reproductive and respiratory syndrome virus; JOE/Yellow for a specific signal of the American genotype of the same virus and Cy5/Red for the internal control signal if the fluorescent signal accumulation curves are up to 35 cycles, then the result of the reaction is considered positive, and if the curves do not cross the threshold line or cross it after 35 cycles, the reaction result is negative.EFFECT: invention provides reliable diagnosis of porcine reproductive and respiratory syndrome and detecting various serotypes of the virus.1 cl, 3 dwg, 4 tbl
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ выявления и генотипирования РНК вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, включающий выделение РНК из биологического материала инфицированных свиней сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с добавлением внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2 и положительного контрольного образца, состоящего из внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2, европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, проведение 40 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченных зондов и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×10копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь, содержащую фрагменты нуклеиновых кислот европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней и фрагмент генома нативного бактериофага MS2, взятых в соотношении 1:1:1, при этом накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: FAM/Green для специфического сигнала европейского генотипа вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней; JOE/Yellow для специфического сигнала американского генотипа этого же вируса и Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции отрицательный. Изобретение позволяет обеспечить достоверную диагностику репродуктивно-респираторного синдрома свиней и выявление различных серотипов вируса. 3 ил., 4 табл.</abstract><oa>free_for_read</oa></addata></record> |
| fulltext | fulltext_linktorsrc |
| identifier | |
| ispartof | |
| issn | |
| language | eng ; rus |
| recordid | cdi_epo_espacenet_RU2703394C1 |
| source | esp@cenet |
| subjects | BEER BIOCHEMISTRY CHEMISTRY COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES ENZYMOLOGY MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS METALLURGY MICROBIOLOGY MUTATION OR GENETIC ENGINEERING PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS SPIRITS VINEGAR WINE |
| title | METHOD FOR DETECTING AND GENOTYPING RNA OF PORCINE REPRODUCTIVE-RESPIRATORY SYNDROME VIRUS |
| url | https://sfx.bib-bvb.de/sfx_tum?ctx_ver=Z39.88-2004&ctx_enc=info:ofi/enc:UTF-8&ctx_tim=2025-02-14T05%3A14%3A34IST&url_ver=Z39.88-2004&url_ctx_fmt=infofi/fmt:kev:mtx:ctx&rfr_id=info:sid/primo.exlibrisgroup.com:primo3-Article-epo_EVB&rft_val_fmt=info:ofi/fmt:kev:mtx:patent&rft.genre=patent&rft.au=Dorozhkin%20Vasilij%20Ivanovich&rft.date=2019-10-16&rft_id=info:doi/&rft_dat=%3Cepo_EVB%3ERU2703394C1%3C/epo_EVB%3E%3Curl%3E%3C/url%3E&disable_directlink=true&sfx.directlink=off&sfx.report_link=0&rft_id=info:oai/&rft_id=info:pmid/&rfr_iscdi=true |