ELECTROCHEMICAL ENZYMATIC COMPLEMENTATION IMMUNOASSAY

An immunoassay diagnostic kit, method, and apparatus for electrochemically determining the concentration of an analyte in a sample. A mixture is formed which includes the sample, an enzyme-acceptor polypeptide, an enzyme-donor polypeptide linked to an analyte analog (enzyme-donor polypeptide conjugated), a labeled substrate, and an antibody specific for the analyte to be measured. The analyte and the enzyme-donor polypeptide conjugate competitively bind to the antibody. When the enzyme-donor polypeptide conjugate is not bound to the antibody, it will spontaneously combine with the enzyme acceptor polypeptide to form an active enzyme complex. The active enzyme hydrolyzes the labeled substrate, resulting in the generation of an electroactive label, which can then be oxidized at the surface of an electrode. A current resulting from the oxidation of the electroactive compound can be measured and correlated to the concentration of the analyte in the sample. La presente invencion se relaciona con un equipo, el método, y el aparato de diagnostico por inmunoensayo para determinar electroquímicamente la concentracion de un analito o sustancia que se va analizar en una muestra. Se forma una mezcla que incluye la muestra, un polipéptido receptor de enzima, un polipéptido donador de enzima ligado a un análogo del analito (conjugado polipéptido donador de enzimas), un sustrato marcado, y un anticuerpo específico para el analito que será un medicamento. El analito y el conjugado polipéptido donador de enzima se unen competitivamente al anticuerpo. Cuando el conjugado polipéptido donador de enzima no se une al anticuerpo, se combinará espontáneamente con el polipéptido receptor de enzima para formar un complejo enzimático activo. La enzima activa hidroliza el sustrato marcado, dando como resultado la generacion de una marca electroactiva, la cual puede ser entonces oxidasa en la superficie de un electrodo. Una corriente electroactiva, resultante de la oxidacion del compuesto, puede ser medida y correlacionada con la concentracion de analito en la muestra.