SYNTHETIC PRODUCTION OF CIRCULAR DNA VECTORS

Provided herein are improved methods of producing therapeutic circular DNA vectors, pharmaceutical compositions produced by such methods, and methods of using pharmaceutical compositions. The invention is based, at least in part, on cell-free manufacturing processes involving restriction digest and ligation schemes, such as restriction digest processes involving type IIs restriction enzymes. Methods provided herein are amenable to large scale production of high-purity compositions of therapeutic circular DNA vectors. En la presente se proporcionan métodos mejorados para producir vectores terapéuticos de ADN circular, composiciones farmacéuticas producidas mediante tales métodos, y métodos para usar las composiciones farmacéuticas. La invención se basa, al menos en parte, en procesos de fabricación sin células que implican esquemas de digestión por restricción y fijación, tal como procesos de digestión por restricción que implican las enzimas de restricción de tipo IIs. Los métodos proporcionados en la presente son susceptibles de la producción a gran escala de composiciones muy puras de vectores terapéuticos de ADN circular.