A labeling method of vesicles and a detecting method of vesicle-target proteins interaction using the same

본 발명은 베시클-단백질 상호작용 (vesicle-protein interaction, VPI)의 형광 이미징 및 정량화를 위한 신규한 프로토콜에 관한 것이다. 본 발명에 따른 염-교체 방법은 종래 알려진 베시클-표지 방법과 비교하여 적은 양의 염료만으로도 간단하고, 신속하게, 그리고 효과적으로 베시클을 표지할 수 있다. 특히, 상기 염-교체 방법은 샘플 내 잔류 염료를 완전히 제거할 수 있어 단일-베시클 수준에서 보다 정확한 베시클의 관찰이 가능하다. 또한, 다양한 세포-유래 베시클이 상기 방법을 통해 효과적으로 표지되는 것이 확인된 바, 본 발명은 프로테오리포좀 등의 인공 베시클부터 천연 베시클에 이르기까지 다양한 종류의 베시클에 범용적으로 적용될 수 있다. 뿐만 아니라, 이와 같이 표지된 베시클은 TIRF (total internal reflection fluorescence) 현미경을 이용하여 단일 베시클 수준에서 관찰할 수 있으므로, 베시클 및 단백질 상호작용의 보다 정확한 검출 및 정량화가 가능하다. 따라서, 본 발명은 베시클 및 타겟 단백질 간 상호작용의 정확한 분석을 위한 신규한 플랫폼을 제공하며, 베시클의 작용 매커니즘을 분석하기 위한 신규한 수단으로 다양한 분야에서 활용될 것으로 기대된다. The present invention relates to a novel protocol for fluorescence imaging and quantification of vesicle-protein interaction (VPI). A salt-change method according to the present invention can label vesicles simply, quickly, and effectively with a small amount of dye compared to conventionally known vesicle-labeling methods. In particular, the salt-change method can completely remove residual dye in a sample, allowing more accurate vesicle observation at a single-vesicle level. In addition, as it has been confirmed that various cell-derived vesicles can be effectively labeled by means of the above method, the present invention can be universally applied to various types of vesicles, ranging from artificial vesicles such as proteoliposomes to natural vesicles. Furthermore, the labeled vesicles can be observed at the single vesicle level using a total internal reflection fluorescence (TIRF) microscope, allowing more accurate detection and quantification of vesicle and protein interactions. Therefore, the present invention provides a novel platform for accurate analysis of the interaction between vesicles and target proteins, and is expected to be used in various fields as a novel means for analyzing the mechanism of action of vesicles.