METHODS FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF SERUM ENZYMES USING IMMUNOASSAY AND METHODS FOR DIAGNOSIS OF HEPATIC DISEASE THEREBY

PURPOSE: A method for quantifying serum enzymes using immunoassay and a method for diagnosis of hepatic disease using the same are provided, thereby accurately diagnosing hepatic disease or progress thereof, and effectively diagnosing chronic hepatic disease. CONSTITUTION: A method for quantifying serum enzyme ALT(alanine aminotransferase) or AST(asphaltate aminotransferase) comprises the steps of: preparing monoclonal antibodies to ALT or AST; constructing hybridoma cell lines producing the monoclonal antibodies; selecting a monoclonal antibody obtained from the hybridoma cell line cultured medium and having improved reactivity with human ALT or AST protein; reacting the selected monoclonal antibody with a blood sample using ELISA to detect serum enzyme ALT or AST which does not bind to an autoantibody, wherein an immunogen used for preparing the monoclonal antibodies is porcine ALT or AST; and the human ALT protein used for selecting a monoclonal antibody is a PCR product using primers having the nucleotide sequences set forth in SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2 and the human AST protein used for selecting a monoclonal antibody is a PCR product using primers having the nucleotide sequences set forth in SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4. 본 발명은 면역분석법을 이용한 혈청 효소의 정량적 측정방법 및 이 방법을 이용한 간 질환 검사방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 혈청 효소, 특히 알라닌 아미노전이효소(ALT) 또는 아스팔테이트 아미노전이효소(AST)에 대한 단일클론 항체를 이용하여 샌드위치 효소매개면역분석법(ELISA)으로 피검체의 혈액 시료와 반응시켜 이 시료 중에 존재하는 ALT 또는 AST 단백질을 측정하는 것을 포함하여, 피검체의 혈액내 ALT 또는 AST를 정량적으로 측정하는 방법; 상기 선발된 단일클론 항체를 이용하여 샌드위치 효소매개면역분석법으로 피검체의 혈액 시료와 반응시켜 이 시료 중에 존재하는 ALT- 또는 AST-항체 복합체의 농도를 측정하는 것을 포함하여, 피검체의 혈액내 ALT- 또는 AST-항체 복합체를 정량적으로 측정하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 돼지의 ALT 또는 AST 단백질을 항원으로 이용하여 샌드위치 효소매개면역분석법으로 피검체의 혈액 시료와 반응시켜 시료 중의 항-ALT 또는 항-AST 자가항체의 존재 및 농도를 측정하는 것을 포함하여, 피검체의 혈액내 ALT 또는 AST에 대한 자가항체를 정량적으로 측정하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 효소-항체 복합체 측정방법에 따라 간 질환이 의심되는 피검체의 혈액 시료를 분석하여 측정된 AST- 또는 ALT-항체 복합체 수치 및 상기 자가항체 측정방법에 따라 측정된 자가항체 수치에 근거하여 간 질환을 검사하는 방법을 제공한다. 또한, 전술한 단일클론 항체를 이용하여 병명을 이미 알고 있는 간 질환자 및 정상인 혈액내의 ALT 또는 AST에 대한 효소-항체 복합체를 그 항체 유형별로 샌드위치효소매개분석법(ELISA)으로 정량적으로 측정한 뒤, 각 혈액내 그 항체 유형별 정량적 측정치와 그 항체의 생화학적 효소활성도 측정치를 상호관련시켜 확인한 각 항체유형별 상호관련성 특이성 패턴을 기본 패턴으로 삼아, 미지의 환자 혈액에 존재하는 효소-항체 복합체의 항체유형별 정량적 측정치와 생화학적 효소활성도 측정치를 상기 기본 패턴과 비교함으로써 간 질환의 여부 내지는 간 질환의 진행정도를 검사하는 방법을 제공한다. 이 방법들에 따르면, 정확하게 간 질환 내지는 간 질환 진행정도를 검사할 수 있으며, 특히 효소활성도 측정법에 의한 임상 검사시 특이성이 낮아 적용할 수 없던 만성적인 간 질환 진단에도 효과적으로 이용될 수 있을 것으로 기대한다.