绵羊李斯特菌载体结核疫苗株inlB1基因缺失减毒株的构建及评价

目的 对以绵羊李斯特菌（Listeriaivanovii，LI）为载体的结核疫苗候选株LI-Ag85C进行基因减毒，初步评价其体内外生物学特性。方法 构建含有inlB1基因上、下游同源序列的打靶质粒，电转原始菌LI-Ag85C感受态细胞，同源重组敲除inlB1基因；测定减毒株LIΔinlB1-Ag85C和原始株LI-Ag85C的体外生长曲线；测定两株菌对于肝癌细胞系HepG2细胞的黏附、侵袭能力的影响，比较两株菌溶血能力的差异，两株菌对于小鼠的半数致死量（median lethal dose，LD50）差异。结果 敲除inlB1基因的重组结核疫苗候选株LIΔinlB1-Ag85C的基因序列符合预期结果。减毒株与原始株的体外生长情况基本一致；对于HepG2细胞的黏附率分别为6.66%和7.46%，侵袭率分别为0.031%和0.042%，减毒株的黏附、侵袭能力均低于原始株，但差异无统计学意义；减毒株的溶血活性较原始株无明显变化；对小鼠的LD50值分别为3.2×10^8 CFU/只和6.7×10^7 CFU/只，减毒株LD50相较于原始株明显提高。结论 成功构建inlB1基因缺失的新型结核疫苗候选株LIΔinlB1-Ag85C，其毒力较原始株降低。