海马齿小热激蛋白SpHSP18.1基因的克隆及盐胁迫表达分析

为探究海马齿高盐环境耐受性的分子机制,根据海马齿c DNA文库序列设计引物,采用RACE（Rapid amplification of cDNA ends）技术克隆得到海马齿小分子热激蛋白Sp Hsp18.1基因序列.Blast分析表明,该c DNA序列（968 bp）含完整开放阅读框（ORF）全长为489 bp,编码162个氨基酸.等电点（p I）为6.19,分子量（Mr）大小为1860 5.90.Sp HSP18.1编码氨基酸序列具有分子伴侣蛋白特有的ACD保守区域（Alpha crystallin domain）,与拟南芥、西瓜等植物的细胞质I型小热激蛋白具较高同源性（〉75%）.将Sp Hsp18.1基因克隆到PUCm-T原核表达载体上,得到重组菌株,通过过量表达探究其耐热胁迫能力.结果表明,在37℃下重组菌株与野生型菌株的生长曲线基本相似,但在高温（45℃）下,重组菌株较对照组菌株存活率有显著提高.荧光实时定量PCR分析表明,在不同浓度海水培养条件下,海马齿根部均表达Sp Hsp18.1基因,且随着海水浓度的增加,该基因的表达量呈现上升的趋势.说明Sp Hsp18.1基因在海马齿应答高盐胁迫过程中起到一定的作用.