从白屈菜乙醇提取物中分离出的白屈菜碱通过p38-p53和P13K／AKT信号转导通路促进HeLa细胞凋亡

目的：研究从白屈菜乙醇提取物中分离出的白屈菜碱在诱导HeLa细胞凋亡中的作用及参与其作用的主要信号转导通路。方法：细胞先以不同浓度白屈菜碱处理48h，用噻唑蓝法分析确定半数致死量（medianlethaldose，LD50）。用4＇，6-二脒基-2-苯基吲哚染色，追踪分析核浓染以及DNA损伤和碎片的形态学变化，并用流式细胞术分析检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）的产生以及细胞周期阻滞和线粒体膜电位的变化。用圆二色光谱分析寻找白屈菜碱和小牛胸腺DNA可能的相互作用。用逆转录聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法测定p38、p53、蛋白激酶B（proteinkinase B，AKT）、磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3-kinases，PI3K）、Janus激酶3（Janus kinase 3，JAK3）、信号转导及转录激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）等的mRNA和蛋白表达，以及E6、E7癌基因和促凋亡基因、抗凋亡基因的mRNA和蛋白表达。结果：根据白屈菜碱的LD50（30μg／mL），选定3种实验剂量，即22．5、30和37．5μg／mL。结果显示，白屈菜碱抑制了HeLa细胞增殖，诱发其细胞凋亡，表现为ROS的产生，细胞亚G1和G0／G1周期阻滞，线粒体膜电位变化和DNA碎片产生。圆二色光谱分析结果显示白屈菜碱和小牛胸腺DNA间存在有效的相互作用。信号通路的研究显示白屈菜碱通过上调p38、p53和其他促凋亡基因的表达，以及下调AKT、P13K、JAK3、STAT3、E6、E7和其他抗凋亡基因的表达，有效诱发细胞凋亡。结论：从白屈菜中分离出的自屈菜碱能通过改变p38-p53及AKT／P13激酶信号转导通路有效地诱发HeLa细胞凋亡。