Notch1信号途径在食管鳞癌细胞中的激活及对细胞周期的影响

目的 观察Notch1信号途径在食管鳞癌EC9706细胞中的激活状态及 其对细胞周期的影响。方法 通过免疫细胞化学检测Notch1基因在 食管鳞癌细胞株EC9706细胞中的表达，并通过免疫荧光方法研究 Notch1基因在EC9706细胞中的激活状态。并且利用CCK-8试剂检测食管癌细胞的增殖状态。此外，采用RT-PCR和Western blot技术检 测与细胞周期相关基因的表达，最后通过流式细胞仪进一步探索激 活的Notch1信号途径对细胞周期的影响。结果 转染pcNICD后的食 管鳞癌细胞株中发现Notch1基因的表达。免疫荧光结果显示，转染pcNICD后的食管鳞癌细胞株中Notch1信号途径处于激活状态。与未处理和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比，稳定表达NICD的EC9706细 胞的生长速率明显受到抑制（P〈0.01）。此外，与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比，稳定表达NICD的EC9706细胞的CDK2, cyclin D1和E基因的mRNA和蛋白的表达明显下调（P〈0.05）。转染pcNICD的EC9706细胞在G0/G1期的比率高达74.5%，而未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞在G0/G1期的比率分别为59.1%和59.0%。细胞周期分析显示瞬时表达NICD的EC9706细胞在G0/G1期比率的增加，提示激活的Notch1信号途径能够诱导细胞静止在G0/G1 期。结论 Notch1信号途径的激活引起食管鳞癌细胞的细胞周期 静止，提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点。