一株PEDV广东流行株S1基因遗传进化分析及其在昆虫细胞中的表达纯化

一株PEDV广东流行株S1基因遗传进化分析及其在昆虫细胞中的表达纯化

为了解猪流行性腹泻病毒广东流行株的S1基因流行变异情况，制备相应的诊断试剂，试验采用RT-PCR从猪流行性腹泻疑似发病仔猪的肠道内容物中扩增获得S1基因，利用生物信息学软件构建S1基因的遗传进化树。将S1基因克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac1，转化至DH10Bac感受态细胞中，经抗生素筛选重组杆粒，把重组杆粒转染到昆虫细胞Sf9，盲传3代后进行间接免疫荧光试验和Western blot鉴定。结果表明：该猪流行性腹泻病毒广东流行株分布于GII-b分支，与国内猪流行性腹泻病毒分离株（HN-HB1-2018、HBHA2015）的核苷酸相似性为98.0%～98.3%，而与猪流行性腹泻病毒经典毒株...

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Veröffentlicht in:肇庆学院学报 2024-03, Vol.45 (2), p.16-21
Hauptverfasser: 刘郁夫, 林晓慧, 谭银娟, 冯美莹
Format: Artikel
Sprache:chi
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container_title 肇庆学院学报
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creator 刘郁夫
林晓慧
谭银娟
冯美莹
description 为了解猪流行性腹泻病毒广东流行株的S1基因流行变异情况，制备相应的诊断试剂，试验采用RT-PCR从猪流行性腹泻疑似发病仔猪的肠道内容物中扩增获得S1基因，利用生物信息学软件构建S1基因的遗传进化树。将S1基因克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac1，转化至DH10Bac感受态细胞中，经抗生素筛选重组杆粒，把重组杆粒转染到昆虫细胞Sf9，盲传3代后进行间接免疫荧光试验和Western blot鉴定。结果表明：该猪流行性腹泻病毒广东流行株分布于GII-b分支，与国内猪流行性腹泻病毒分离株（HN-HB1-2018、HBHA2015）的核苷酸相似性为98.0%～98.3%，而与猪流行性腹泻病毒经典毒株CV777、DR13的核苷酸相似性仅为89.9%～90.0%。且S1重组蛋白可在昆虫细胞Sf9中以细胞培养分泌上清的形式表达。本研究可为猪流行性腹泻病毒的流行现状研究提供参考，以及后续猪流行性腹泻病毒诊断制品的研发提供前期基础。
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